多裂翅果菊中菊苣酸的分离纯化与微生物转化

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多裂翅果菊是一种资源丰富的极具开发价值的菊科草本植物,具有抗氧化、抗肿瘤以及抗心脑血管疾病等多种功能,但国内外学者对其研究很少。本工作对多裂翅果菊中的主要成分——菊苣酸进行了提取优化、分离纯化和抗氧化活性的评价,对菊苣酸的提取液进行了微生物转化,主要工作如下:(1)对多裂翅果菊提取液中的多酚类成分进行了鉴定。利用LC-MSn技术首次在该植物的提取液中鉴定了菊苣酸、灯盏乙素、单咖啡酰酒石酸、绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸这5种成分,且菊苣酸是主要的成分。(2)对包括多裂翅果菊在内的20种植物进行了多酚类成分的含量比较。研究结果表明,多裂翅果菊中菊苣酸的含量最高(26.1 mg/g),是提取菊苣酸的传统原料——紫锥菊(11.8 mg/g)的2.2倍。而且,它的生物量也比较有优势。因而,多裂翅果菊是一种比紫锥菊更为优越的、非常具有潜力的提取菊苣酸的新原料。同时,本工作对于扩大菊苣酸、灯盏乙素、单咖啡酰酒石酸、绿原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸这5种天然药物的来源具有重要的意义。(3)采用单因素实验和正交试验对菊苣酸的提取条件进行了优化,确定将80%的乙醇溶液作为提取溶剂,以料液比1:100的比例在45 ℃超声提取70 min为最佳提取工艺,此时,菊苣酸的提取率为92.57%。(4)对多裂翅果菊提取液中的菊苣酸进行了分离纯化工作。通过静态吸附和解吸实验,确定ADC 201大孔树脂和聚酰胺作为分离材料。经ADC 201大孔树脂初步纯化后,菊苣酸的纯度为49.41%(回收率为73.72%);用聚酰胺二次纯化后,菊苣酸的纯度提高到72.03%(回收率为81.40%)。(5)对多裂翅果菊中的菊苣酸进行了抗氧化活性的探究。研究结果表明,菊苣酸纯化物清除·OH自由基和02-自由基的能力与同浓度的Vc相当,是一种强抗氧化剂;并且菊苣酸纯化物(菊苣酸含量72%)对DPPH·自由基、·OH自由基、02-自由基三种自由基的清除能力均高于菊苣酸提取物(菊苣酸含量2%),说明菊苣酸对自由基的清除率与其含量成正比,二者清除自由基的能力都以O2-自由基最强,DPPH·自由基和·OH自由基次之。(6)对多裂翅果菊提取液的微生物转化结果表明,黑根霉对提取液的转化效果最为显著,经77 h菊苣酸被转化97.3%,转化液中单咖啡酰酒石酸增加了 1.22倍,咖啡酸增加了 8.34倍,3,4-二甲氧基肉桂酸增加了 10.65倍。因此,本工作可以为咖啡酸、3,4-二甲氧基肉桂酸以及单咖啡酰酒石酸的制备提供一种新的方法。
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