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两栖类皮肤抗菌肽因具有广谱抗微生物、抗肿瘤等活性和低免疫原性,以及独特抗菌作用机制,作为新一代抗生素药物候选分子的新来源而成为当今国际上生命科学领域中主流研究的热点之一。 本研究以两栖类代表物种东北林蛙(Rana dybowskii)为材料,以大肠杆菌(Escherichia coli)和金色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)为特异刺激原,分别注射至林蛙背部淋巴囊特定时间后,取其皮肤甲醇抽提物,经SephadexG-50、反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化皮肤活性肽,比较E.coli和S.aureus胁迫下林蛙皮肤活性肽表达谱有无差异,通过体外抑菌试验,观察E.coli和S.aureus胁迫下皮肤活性肽组分对E.coli和S.aureus的抗菌效果,分析其皮肤活性肽差异性表达的规律;为后续有针对性筛选抗菌活性肽,深入探讨作为先天免疫系统的重要效应因子(活性肽)在生物进化过程中的作用及规律,提供新思路。 结果显示,特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽组分的抑菌活性均呈增强趋势,且不同细菌胁迫下HPLC活性肽谱显示其表达量的差异,其中洗脱峰2、3、4、8、11和13对G-菌有抑制作用,而洗脱峰3、4、5、6和9对G+菌有抑制作用;并在一定时间内,各主要多肽洗脱峰随细菌胁迫时间呈上调表达,抑菌活性也呈增强趋势。提示,不同细菌胁迫下东北林蛙皮肤选择性表达特定抗菌肽组分,在多肽组合和表达量上提高了机体对特定微生物胁迫下的抗菌活性。