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胶质细胞瘤是最常见的脑肿瘤，虽经采用手术、放疗、化疗及基因治疗等综合疗法，但预后仍较差，这主要是因为瘤细胞在脑内呈侵袭性生长所致。目前，有关胶质细胞瘤侵袭分子机理的研究日益受到重视，而良好的实验模型是准确揭示瘤细胞的侵袭生长特性，进而阐明其分子机理的基础。绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP）是近年来发现的一种化学性能稳定的分子，已经在多种细胞中获得表达并用于定位蛋白及示踪细胞等研究。 胶质细胞瘤脑内侵袭是瘤细胞与细胞外基质成分相互作用的多步骤、多阶段的复杂过程。透明质酸（Hyaluronic Acid, HA）是脑内细胞外基质的主要成分之一，很可能参与胶质瘤细胞脑内的侵袭过程。目前已有报道证实，侵袭性胶质细胞瘤组织高表达HA的受体CD44和BEHAB，这似乎是HA诱导胶质瘤细胞侵袭的间接证据，但HA诱导肿瘤侵袭的直接证据尚未见报道。探讨外源性HA对脑内胶质细胞瘤增殖、侵袭的影响，将为阐明HA在胶质细胞瘤增殖、侵袭中的作用方式及其分子机理提供实验依据。 本研究首先采用脂质体介导法，在体外将外源性EGFP（Enhanced GreenFluorescent Protein）基因转染入C6胶质瘤细胞，利用含G418的培养基 第四军医大学颀士学位论文 筛选稳定转染细胞井扩增培养。将稳定转染目的基因和对照空载体的细胞 分别命名为C6－E－N细胞和C6－N细胞。采用流式细胞仪、透射电镜检测外 源基因对转染细胞周期和超微结构的影响：通过绘制细胞生长曲线和＊t 实验，检测EGFP基因对转染细胞体外增殖速率和生长活力的影响；荧光显 微镜检测转染细胞目的基因的表达：裸鼠致瘤性实验检测转染细胞的体内 致瘤性改变。 本实验第二部分以立体定向法将肿瘤细胞接种于大鼠右脑尾状核，建 立大鼠脑内胶质细胞瘤模型（三组分别接种 C6．E－N、C6．N和 C6细胞）。 监测荷瘤动物生存及移植瘤脑内生长情况并作组间比较。制备荷瘤鼠脑连 续石蜡切片，相邻切片分别行HE、GFAP免疫组化染色并用荧光显微镜检 测，对三种染色条件下的肿瘤细胞计数并行统计学分析。对移植肿瘤进行 原代培养，以检测EGFP基因在体内的保存倩况。 实验第三部分采用实验二所建立的大鼠脑胶质细胞瘤模型，观察不同 浓度HA对鼠脑胶质细胞瘤体内增殖和侵袭的影响。 研究结果表明：1．EGFP基因在体外稳定转染C6胶质瘤细胞系，对瘤 细胞的细胞周期、超徽结构、增殖速率、裸鼠致瘤性均无明显影响。转染 该基因的C6细胞在体外可稳定表达EGFP；2．移植C6－E－N细胞于大鼠脑 内，建立大鼠脑内胶质细胞瘤模型，瘤组织呈侵袭性生长，符合胶质细胞 瘤体内侵袭模型的标准。荧光显微镜检测瘤细胞的侵袭性，其阳性率明显 高于传统的＊E染色和＊FA P免疫组化染色；3．＞IOm咖1浓度的＊A可明 显促进大鼠脑胶质细胞瘤的增殖与侵袭作用，这为探索脑胶质细胞瘤治疗 的新途径提供了实验依据。