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第一部分结缔组织生长因子在烟雾暴露大鼠肺血管中的表达及其与肺血管重塑的关系目的:探讨在烟雾暴露致大鼠肺血管重塑中结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化及意义。方法:24只雄性成年Wistar大鼠随机分为四组:正常对照组、烟雾暴露1月组、烟雾暴露2月组和烟雾暴露3月组,HE染色观察肺血管重塑,天狼猩红染色检测肺动脉壁胶原增殖,免疫组织化学染色法观察增殖细胞核抗原(PCNA)在肺动脉中的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺动脉CTGF mRNA表达,Western Blot法观察CTGF蛋白在肺动脉中的表达。结果:(1)四组肺动脉管壁面积/管总面积(WA%)分别为(30.5±1.6)%、(43.3±2.0)%、(49.3±1.2)%、(60.3±2.9)%,随烟雾暴露时间延长,WA%逐渐增加。(2)四组肺动脉管壁胶原厚度分别为(4.5±0.7)μm、(8.8±1.2)μm、(11.8±2.7)μm、(15.3±2.9)μm。随烟雾暴露时间延长,肺动脉管壁胶原异常增多、沉积逐渐加重,且以Ⅰ型胶原为主。(3)四组肺动脉PCNA表达量分别为(0.082±0.022)、(0.147±0.032)、(0.286±0.022)、(0.297±0.041)。随烟雾暴露时间延长,肺动脉PCNA表达量逐渐增加。(4)四组肺动脉CTGF mRNA相对表达量分别为(0.032±0.012)、(0.644±0.351)、(2.749±0.458)、(2.337±0.149)。随烟雾暴露时间延长,肺动脉CTGF mRNA表达量逐渐增加。(5)四组肺动脉CTGF蛋白表达量分别为(0.218±0.037)、(0.754±0.142)、(1.439±0.348)、(2.267±0.519)。随烟雾暴露时间延长,肺动脉CTGF蛋白表达量逐渐增加。(6)肺动脉CTGF mRNA及蛋白表达量与WA%均呈正相关(r分别为0.841、0.862,P<0.01),CTGF mRNA及蛋白表达量与PCNA表达亦均呈正相关(r分别为0.869、0.887,P<0.01)。结论:大鼠烟雾暴露后早期即出现肺血管重塑,且随时间延长逐渐加重,CTGF在肺动脉中的表达逐渐升高,可能在此过程中起重要作用。第二部分结缔组织生长因子在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的作用研究目的探讨对烟雾暴露大鼠在体应用结缔组织生长因子反义寡核苷酸(CTGF ASON)对肺血管重塑的影响。方法35只大鼠随机分为正常对照组(A组)、烟雾暴露1月组(B组)、烟雾暴露+大剂量CTGF ASON 1月组(C组)、烟雾暴露+小剂量CTGF ASON 1月组(D组)、烟雾暴露2月组(E组)、烟雾暴露+大剂量CTGF ASON 2月组(F组)、烟雾暴露+小剂量CTGF ASON 2月组(G组),每组5只。HE染色观察肺血管重塑,免疫组化观察增殖细胞核抗原(PCNA)及CTGF在肺动脉中的表达,RT-PCR检测肺动脉CTGF mRNA表达。结果(1)各组肺动脉管壁面积/管总面积(WA%)分别为(28.6±1.2)%、(42.5±2.3)%、(33.7±1.8)%、(42.1±2.4)%、(49.6±2.1)%、(34.3±1.9)%、(38.4±2.0)%。C组较B组显著降低,F、G组较E组显著降低。(2)各组肺动脉平滑肌PCNA表达(A值)分别为(0.102±0.026)、(0.186±0.033)、(0.146±0.022)、(0.179±0.032)、(0.348±0.041)、(0.149±0.030)、(0.156±0.034)。C组较B组显著降低,F、G组较E组显著降低。(3)各组肺动脉平滑肌CTGF蛋白表达(A值)分别为(0.098±0.015)、(0.159±0.023)、(0.118±0.017)、(0.153±0.022)、(0.406±0.036)、(0.109±0.012)、(0.146±0.024)。C组较B组显著降低,F、G组较E组显著降低。(4)各组肺动脉CTGF mRNA表达(A值比)分别为(0.051±0.010)、(0.823±0.096)、(0.216±0.056)、(0.810±0.085)、(2.452±0.267)、(0.207±0.062)、(0.509±0.067)。C组较B组显著降低,F、G组较E组显著降低。(5)肺动脉CTGF mRNA及蛋白表达量与WA%均呈正相关(r分别为0.841、0.902,P<0.01),CTGF mRNA及蛋白表达量与PCNA表达亦均呈正相关(r分别为0.929、0.887,P<0.01)。结论在体应用CTGF ASON可显著降低烟雾暴露诱导的大鼠肺血管重塑,CTGF可能在肺动脉高压的发生发展中起重要作用。第三部分结缔组织生长因子在香烟致大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用研究目的探讨香烟提取物(CSE)对培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(rPASMC)增殖的影响及结缔组织生长因子(CTGF)在其中的作用。方法培养的rPASMC随机分为组:正常对照组(A组)、CSE组(B组)、缺氧对照组(C组)、CSE+rhTGF-β1组(D组)、CSE+CTGF正义寡核苷酸组(E组)、CSE+CTGF反义寡核苷酸(ASON)组(F组),干预24h后用MTT比色法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学法检测增殖变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及免疫细胞化学法检测CTGF mRNA及蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中?型胶原含量。结果B组MTT结果为(0.311±0.009),与A组(0.230±0.010)比较差异有统计学意义(P<0.01),D组(0.351±0.014)、F组(0.268±0.007)与B组比较差异均有统计学意义(P均<0.01),而E组(0.303±0.011)与B组比较差异无统计学意义(P>0.05);PCNA染色变化与MTT结果有相似趋势。rPASMC内CTGF蛋白表达量B组为(0.314±0.005),与A组(0.199±0.005)比较差异有统计学意义(P<0.01),D组(0.392±0.008)、F组(0.202±0.009)与B组比较差异均有统计学意义(p均<0.01),而E组(0.323±0.007)与B组比较差异无统计学意义(P>0.05);CTGF mRNA表达结果与蛋白表达有相似趋势。细胞培养上清液中?型胶原含量B组为(78.7±1.3)ng/ml,与A组[(50.9±1.0)ng/ml]比较差异有统计学意义(P<0.01),D组[(104.9±2.0)ng/ml]、F组[(51.4±0.6)ng/ml]与B组比较差异均有统计学意义(P<0.01),而E组[(81.7±1.8)ng/ml]与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CSE能诱导rPASMC细胞增殖,使细胞表现为合成表型,CTGF可能在其中起着重要作用。第四部分结缔组织生长因子在吸烟者及COPD患者肺血管中的表达及其与肺血管重塑的关系目的探讨在吸烟者及慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的肺血管重塑中结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化及意义。方法24例手术切除肺叶患者,分别为非吸烟对照组(N组)、吸烟组(S组)及吸烟伴COPD组(S+C组)各8例,HE染色观察肺血管重塑,天狼猩红染色及偏振光显微镜检测胶原增殖,免疫组织化学染色观察增殖细胞核抗原(PCNA)在肺动脉的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺动脉CTGF mRNA表达,Western Blot法观察CTGF蛋白在肺动脉中的表达。结果(1)N组、S组和S+C组肺动脉管壁面积/管总面积(WA%)分别为(28.4±4.7)%、(46.3±3.5)%、(55.5±3.9)%,S组及S+C组较N组管壁明显增厚(P<0.01)。(2)N组、S组和S+C组肺动脉壁胶原厚度分别为(6.4±1.6)μm、(15.9±2.4)μm、(16.4±2.3)μm,S组及S+C组胶原较N组明显增多(P<0.01)。(3)N组、S组和S+C组肺动脉PCNA表达量分别为(0.084±0.006)、(0.178±0.018)、(0.226±0.134),S组及S+C组表达较N组明显增加(P<0.01)(。4)N组、S组和S+C组肺动脉CTGF mRNA表达量分别为(0.095±0.015)、(0.396±0.167)、(0.501±0.177),S组及S+C组表达较N组明显增加(P<0.01)。(5)N组、S组和S+C组肺动脉CTGF蛋白表达量分别为(0.158±0.021)、(0.545±0.095)、(1.303±0.191),S组及S+C组表达较N组明显增加(P<0.01)。(6)CTGF mRNA及蛋白表达量与WA%均呈明显正相关(r分别为0.815、0.799, P<0.01),CTGF mRNA及蛋白表达量与PCNA亦均呈明显正相关(r分别为0.838、0.821,P<0.01)。结论单纯吸烟者即已有肺血管重塑,伴有COPD者更加加重,CTGF可能在此过程中起重要作用。第五部分结缔组织生长因子在香烟致人肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用研究目的探讨香烟提取物(CSE)对培养的人肺动脉平滑肌细胞(hPASMC)增殖的影响及结缔组织生长因子(CTGF)在其中的作用。方法培养的hPASMC随机分为7组:正常对照组(A组)、缺氧对照组(B组)、CSE组(C组)、CSE+rhTGF-β1组(D组)、CSE+CTGF正义寡核苷酸组(E组)、CSE+CTGF反义寡核苷酸(ASON)组(F组),干预24h后用MTT比色法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学法检测增殖变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及免疫细胞化学法检测CTGF mRNA及蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中?型胶原含量。结果C组的MTT结果为(0.275±0.007),与A组(0.212±0.007)比较差异有统计学意义(P<0.01);D组(0.322±0.009)、F组(0.245±0.005)与C组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);E组(0.283±0.010)与C组之间无显著性差异(P>0.05);PCNA染色变化与MTT结果有相似趋势。hPASMC内CTGF蛋白表达量C组为(0.368±0.006),与A组(0.208±0.003)比较差异有统计学意义(P<0.01);而D组(0.432±0.008)、F组(0.218±0.004)与C组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);E组(0.380±0.009)与C组之间无显著性差异(P>0.05);CTGF mRNA表达结果与蛋白表达有相似趋势。细胞培养上清液中?型胶原含量C组为(215.4±3.9)ng/ml,与A组([140.0±1.8)ng/ml]比较差异有统计学意义(P<0.01),D组([257.5±3.4)ng/ml]、F组[(143.0±1.1)ng/ml]与C组比较差异均有统计学意义(P均<0.01),而E组[(211.2±2.5)ng/ml]与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CSE能诱导hPASMC细胞增殖,使细胞表现为合成表型,CTGF可能在其中起着重要作用。