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目的:内皮细胞(endothelial cell,EC)功能失调和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化与心血管疾病密切相关。平滑肌22 alpha(smooth muscle 22 alpha,SM22α)是细胞骨架相关蛋白,在分化型VSMC中高表达,参与细胞骨架重构和VSMC表型调节。缺失SM22α可加剧血管炎症。SM22α对VSMC的作用已得到充分证实,但其对VSMC的作用是否影响EC的功能尚无研究报道。本研究采用野生型(wild-type,WT)和SM22α基因敲除(SM22α-/-)小鼠VSMC条件培养基(VSMC conditioned medium,VSMC-CM)分别处理EC,观察其对EC功能的影响。方法:1应用Ang II处理C57BL/6 WT及SM22α-/-小鼠VSMC 24 h,收集细胞,采用免疫共沉淀和双荧光免疫染色检测VCAM-1与SMα-actin的相互作用。2收集Ang II处理24 h的VSMC-CM,孵育人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)24 h后,Western blot检测HUVEC中eNOS和MCP-1的表达,分析培养基NO含量。3应用WT或SM22α-/-VSMC条件培养基处理HUVEC,跨膜迁移分析检测不同培养条件下HUVEC对单核巨噬细胞趋化活性的影响。结果:1 SM22α缺失促进AngII诱导的VSMC膜结合型VCAM-1的表达为观察F-actin与膜表面VCAM-1表达之间的关系,首先分离细胞F-actin组分,用抗SMα-actin抗体沉淀,所得沉淀组分用Western blot检测与SMα-actin结合的VCAM-1。结果显示,从未刺激的WT VSMC F-actin中几乎检测不到VCAM-1;而静止状态的SM22α-/-VSMC的F-actin组分可检测出少量结合的VCAM-1;在Ang II刺激后,与WT相比,SM22α-/-VCAM-1与SMα-actin的结合活性显著增加。细胞免疫荧光染色结果显示,在WT VSMC中,F-actin呈束状,平行排列,而在SM22α-/-VSMC中,F-actin稀疏,主要分布在细胞皮层边缘区;与WT相比较,AngII诱导的SM22α-/-细胞皮层F-actin与VCAM-1共定位荧光强度增强,其主要分布于细胞膜表面,与免疫共沉淀结果一致。结果表明,SM22α缺失促进VSMC膜表面结合型VCAM-1的表达,这与细胞皮层F-actin的相互作用增强有关。2 SM22α-/-VSMC条件培养基抑制内皮细胞eNOS表达,NO释放减少为了研究VSMC缺失SM22α是否诱导EC功能障碍,用Western blot检测HUVEC eNOS表达。结果显示,与WT比较,Ang II处理和未处理的SM22α-/-VSMC-CM对内皮细胞eNOS表达均有抑制作用;并且,AngII处理24 h的SM22α-/-VSMC-CM抑制HUVEC中eNOS表达的作用比WT更加明显(P<0.01)。对HUVEC培养基中NO含量进行分析,结果显示,各组细胞NO释放量的变化趋势与eNOS表达变化具有平行关系,SM22α-/-VSMC-CM处理的HUVEC其NO合成明显低于野生组(P<0.01)。3 SM22α-/-VSMC条件培养基诱导内皮细胞MCP-1分泌增多为了证实SM22α-/-VSMC外泌物对EC是否有激活作用,检测HUVEC培养基中MCP-1的表达量。Western blot分析显示,SM22α-/-VSMC-CM处理的内皮细胞其培养基MCP-1表达量明显高于野生型处理组,而且,比较AngII处理后的诱导活性,SM22α-/-比WT升高更加明显(P<0.05)。细胞跨膜迁移实验结果显示,被VSMC-CM处理的内皮细胞外泌物可增加巨噬细胞跨膜迁移活性,而且与MCP-1的表达量呈正相关关系。结果表明缺失SM22α后AngII诱导的VSMC旁分泌可诱导EC功能失调进而加剧血管炎症。结论:1缺失SM22α促进VSMC炎症应答;2缺失SM22α的VSMC旁分泌诱导EC功能失调。