【摘 要】
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肝细胞癌相关抗原-59(Hepatocellularcarcinoma-associatedantigen59，Hep59)，属于哺乳动物中一类含有的大约100个氨基酸残基的保守结构域家族，目前发现的这类蛋白主要存在于真核
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肝细胞癌相关抗原-59(Hepatocellularcarcinoma-associatedantigen59，Hep59)，属于哺乳动物中一类含有的大约100个氨基酸残基的保守结构域家族，目前发现的这类蛋白主要存在于真核生物细胞中，大多为假想蛋白。
从本实验室家蚕蛹期cDNA文库中克隆得到一条全长为1061bp的基因序列，其NCBI登录号为DN985181，其开放阅读框(ORF)为681bp，编码226个氨基酸残基，预测分子量为26.1kD，等电点为7.89。将该预测的氨基酸序列进行生物信息学分析，发现存在一个和Hep59高度同源的保守结构域，并且N末端不太可能存在信号肽，具有较强的亲水性。
通过PCR扩增目的基因完整ORF框，经过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切，将该基因重组到带有His-标签的融合表达载体pET28at(+)后转化TG1中质粒扩增，再转化到EcoliRosetta(DE3)菌中表达分析，SDS-PAGE检测在29.9kD处有特异性条带出现，融合蛋白以可溶形式存在，经镍柱亲和层析纯化得到较纯融合蛋白BmLHep59，以此纯化融合蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体，经ProteinAHP凝胶柱纯化后，ELISA检测该抗体血清的效价可达到1:12000。对BmLHep59的分布检测显示该蛋白在家蚕的表皮、丝腺、血淋巴3个组织中有分布，并且在血淋巴中分布量较高，另外在蚕蛹中也有分布，且分布量最高；亚细胞定位显示该蛋白在家蚕Bm5细胞的细胞质和细胞核中均有分布。
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