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癌胚抗原(CarcinoembryonicAntigen，CEA)是广泛分布于胃肠道及其它组织起源肿瘤细胞的肿瘤抗原，在恶性肿瘤诊断及肿瘤靶向治疗等方面具有重要应用价值，但经典的癌胚抗原检测ELISA方法涉及抗体制备和抗原或抗体蛋白包被等繁复步骤，有鉴于此，我们另辟蹊径，利用表面展示载体将癌胚抗原单链抗体(CarcinoembryonicAntigen-scFv，CEA-scFv)展示于细菌表面，有利于抗体与癌胚抗原的直接接触。 1.构建pBAD-OmpA-mCherry-CEA重组质粒，并将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中得到重组菌。利用WesternBlot、胰酶消化实验以及全菌ELISA实验验证了重组菌的表面展示功能。 2.为鉴定目的蛋白，首先采用贴壁法和悬浮法检测肿瘤细胞表面癌胚抗原的表达水平，再利用ELISA法和免疫荧光显微镜观察重组菌与可溶性癌胚抗原的结合。 3.利用细菌侵染实验验证重组菌对癌胚抗原阳性肿瘤细胞的特异性，再利用ELISA法和基于细菌的适配体连接免疫吸附测定(ALISA-B)检测重组菌与结肠癌患者血清癌胚抗原的结合能力。 本实验成功构建了pBAD-OmpA-mCherry-CEA重组菌，胰酶消化实验结果说明重组菌表面展示的融合蛋白能够直接被胰酶所影响，其重组菌的表面展示功能得到了验证。全菌ELISA实验进一步证明了重组菌表面展示功能。 重组菌与可溶性癌胚抗原的实验结果说明重组菌展示的目的蛋白CEA-scFv能够有效结合可溶性癌胚抗原。细菌侵染细胞实验结果说明重组表达菌能够特异性靶向侵染癌胚抗原阳性的A549细胞。 ELISA法和基于细菌的适配体连接免疫吸附测定实验中，均证明了在稀释度为10倍时实验组的OD450是对照组的2倍以上，初步证明表面展示CEA-scFv能够与结肠癌患者血清中的癌胚抗原结合。 表面展示CEA-scFv的重组菌不但可以有效结合可溶癌胚抗原，还能与结肠癌患者血清中的癌胚抗原结合，此外，重组菌能够特异性靶向侵入癌胚抗原阳性的A549细胞。