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恶性肿瘤严重威胁着人类的生命和健康,而肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一。肺癌等恶性肿瘤是由于基因紊乱所引起的疾病,因此基因疗法为人类攻克癌症带来了希望,尤其是靶向癌症基因治疗。载体的选择是癌症基因治疗的关键所在。溶瘤腺病毒载体由于其具有转染率高、制备简单以及肿瘤特异性等优点而成为癌症基因治疗的载体首选。
TSLC1是近年新发现的一个肿瘤抑制因子,在多数肿瘤细胞中被抑制表达。TSLC1在肿瘤发生、细胞粘附、免疫监视、细胞运动及信号转导等方面具有重要作用,有望成为一个潜在的肿瘤治疗基因。因此通过溶瘤腺病毒介导以提高TSLC1在癌细胞中的表达水平及行使其抗癌功能是基因治疗癌症的新策略。
本研究采用癌症的靶向基因.病毒治疗策略,以癌症特异性Survivin启动子(sp)代替E1A本身的启动子,同时将E1ACR2区的24bp(△24)碱基删除,构建溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A(△24)。该溶瘤病毒能特异性在肿瘤细胞选择复制,而对正常细胞影响较小。随后通过基因重组技术将TSLC1基因克隆进溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A(△24)载体,得到新型重组双靶向溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A(△24)-TSLC1,并探讨了该溶瘤腺病毒对肺癌细胞的杀伤力与相关机理的研究。
Real-time quantitative PCR结果表明,TSLC1基因mRNA在肺正常细胞中呈过量表达,而在肺癌细胞中呈严重低表达。Western Blot与PCR实验结果显示Ad.sp-E1A(△24)-TSLC1在肺癌细胞有高效的选择复制能力。MTT检测结果显示相对于正常细胞,Ad.sp-E1A(△24)-TSLC1处理的肺癌细胞存活率大大降低。结晶紫实验检测细胞病变效应表明该溶瘤腺病毒对肺癌细胞有很大的毒性而对正常细胞安全性很好。Hochest33342染色与Western Blot结果证明Ad.sp-E1A(△24)-TSLC1是通过激活caspase信号通路实现诱导细胞凋亡的功能。动物实验证明该溶瘤腺病毒在体内能很好的抑制肿瘤组织的生长,能大大的延长裸鼠的存活率。
本课题利用肿瘤特异性的Survivin启动子和抑癌基因TSLC1进行的靶向基因-病毒治疗策略取得了良好的抗癌效果,为进一步肺癌的临床治疗研究提供了一种较为安全有效的参考治疗方案。