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研究背景及目的背景冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)是严重威胁人类健康和生命的疾病之一。CXC趋化因子配体16(CXCL16)是新近发现的趋化因子CXC家族的一个新成员,它以可溶性及跨膜表达两种形式存在。研究发现,CXCL16具有趋化因子、清道夫受体及粘附分子等三种分子的功能,提示CXCL16/SR-PSOX可能在动脉粥样硬化中起重要作用。最初的体外试验显示,在人及鼠动脉粥样病变中均可检测到CXCL16的高表达。随后的体内试验发现,CXCL16/SR-PSOX可介导T细胞粘附到内皮,驱使T细胞迁移,刺激细胞增殖,促发平滑肌细胞的炎症表型,介导巨噬细胞摄入氧化低密度脂蛋白。所有这些效应均被认为是致动脉粥样硬化作用的。令人不解的是,在鼠动脉粥样动物模型中发现,CXCL16缺失能增加动脉粥样硬化的病损大小,提示其具有抗动脉粥样硬化作用。但它唯一的受体却具有致动脉粥样硬化作用。另外,对循环水平CXCL16/SR-PSOX检测发现,血浆CXCL16浓度与冠心病的关系也是有争议的,既有阳性相关、阴性相关,还有研究显示与冠心病无关,新近还有研究显示其与急性冠脉综合征患者长期死亡率相关。至此,CXCL16/SR-PSOX在动脉粥样硬化中起何种作用,是致病因素、还是其生物学标志,甚至是抗动脉粥样作用目前仍未完全清楚。CXCL16的基因变异可能会调节其表达水平及蛋白功能。一项研究显示位于CXCL16第4外显子的一个单核苷酸多态与虽与冠心病无关,但与冠心病患者的冠脉严重性有关。但该研究仅研究了一个多态,显然不足以完整的反映CXCL16基因变异与冠心病的相关性。并且该研究样本量较小,且尚无中国汉族人这方面的资料。目的首先,我们以HapMap数据库为基础选择CXCL16基因的标签SNPs,在一大型病例-对照研究中分析CXCL16的常见多态与冠心病的相关性。其次,在亚组病例中检测血浆CXCL16水平,探讨其与CXCL16基因型之间的关系。方法:(1)研究对象自2006年6月~2009年3月,从沈阳军区总医院心内科病房选取1176例冠心病患者为病例组,850例冠脉造影阴性者为对照组。所有入选者年龄29岁~75岁,均为汉族,无血缘关系,来自于中国东北地区,在我院接受冠状动脉造影检查。亚组研究对象选自2008年5月~2009年3月于原研究队列,由160例首次发作的急性心肌梗死和160例冠脉造影完全正常者组成。亚组中病例组和对照组在年龄(≤5岁)、性别、吸烟、高血压和糖尿病等方面相匹配。(2)标签SNPs的选择及基因型检测基于HapMap数据库中汉族人群数据库,运用Tagger程序,以r 2≥0.80和少见等位基因频率≥5%为参数,共选择出5个标签SNPs。以PCR-RFLP法检测rs2277680基因型,以PCR-直接测序法检测rs1051009、rs3744700、rs2304973和rs2250333等SNPs的基因型。(3)血浆CXCL16水平检测急性心肌梗死组于发病12h内(1h-12h,平均5.3 h)入院即刻抽取静脉血,对照组于行冠脉造影后次日清晨采集空腹静脉血。将处理好的血浆贮藏于-80℃低温冰箱保存,标本收集齐全后统一采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定CXCL16浓度。结果(1)研究对象的临床特征两组受试者在年龄、性别分布,吸烟、高血压和糖尿病比例,体重指数、LDL-C、HDL-C、甘油三脂和空腹血糖水平等方面均有显著差异。但亚组研究对象的各临床指标在两组间无显著差异。(2) CXCL16基因多态性与冠心病的相关性所研究CXCL16各SNPs的基因型分布在病例组和对照组均符合Hardy-Weinberg平衡。rs3744700的基因型分布和等位基因频率在两组间有显著差别(P = 0.001 and P <0.001, respectively),经Bonferroni纠正多重检验后,差异仍具有显著性。进一步多元回归logistic分析纠正各心血管危险因素后,GG基因型者发生冠心病的风险约是T等位基因携带者(GT + TT)的1.8倍(纠正后OR, 1.77; 95% CI, 1.28-2.43; P < 0.001)。其余4个SNPs的基因型分布及等位基因频率在两组间无显著差别。进一步分析未发现CXCL16各SNPs与冠脉狭窄的严重程度相关,也未发现与771例未服用任何降酯药物的对照组受试者的血脂谱(TG, TC, LDL-C, and HDL-C)存在相关性。(3) CXCL16基因第4内含子调节性功能元件的发掘利用Berkeley Drosophila Genome Project提供的网上剪切位点预测程序。我们发现第4内含子区域有一个剪接受体位点,其可信性评分达到1.00,并且,rs3744700位于该位点上游仅61 bp处。另外我们还发现,第4内含子区域含有多个潜在的功能调节元件,rs3744700正好位于GATA中,T>G极有可能影响其功能。(4)亚组人群的CXCL16血浆水平及其与rs3744700的相关性急性心梗患者其血浆CXCL16水平显著高于对照组(P < 0.01)。但与急性心梗患者病变严重程度无关。在对照组和急性心梗组,GG型者其血浆CXCL16水平均显著高于T等位基因携带者(GT + TT) (分别为P=0.015和P=0.027)。结论CXCL16基因的rs3744700多态是中国汉族人群发生冠心病的独立的危险因子,能增加CXCL16表达的GG基因型可能会促进冠心病的发生。但其余4个SNPs与冠心病的发生无关。