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光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)是目前治疗脉络膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)疾病的主要方法之一，研究显示它能够选择性地封闭脉络膜新生血管组织的同时而较少造成邻近正常组织的损害，具有选择性高，副作用小等优点。临床研究结果显示PDT。能有效的稳定和改善CNV患者的视力，是治疗CNV的理想手段之一。但同时，临床上亦发现PDT。治疗也会伴随着少量的并发症如短期内视网膜下积液增加，视觉紊乱等，因此，如何提高PDT治疗的疗效和减少并发症成为了我们进一步研究的方向。
研究目的
在体外建立良好的视网膜色素上皮屏障模型，研究光动力疗法对于视网膜色素上皮屏障功能的影响，以期为临床上进一步提高治疗效果，减少不良反应提供依据研究
方法
1、将D407人视网膜色素上皮细胞系接种于插入式细胞培养皿(Millicell-PCF)内，每2～3天测量其跨上皮电阻(transepithelial electrical risitance，TER)，HE染色以观察单层视网膜色素上皮屏障模型的建立情况。
2、将培养成功的色素上皮模型分为四个处理组：A组：空白对照组；B：
组单纯激光照射组(B1组：激光照射83S，B2组激光照射42S)；C组：单纯光敏剂作用组(C1组光敏剂浓度2mg/ml，C2组光敏剂浓度1.6μg／ml，C3组光敏剂浓度0.1μg／ml)；D组：PDT作用组(按光敏剂浓度和激光照射时间分为：D1组200μg／ml,83S；D2组200μg／ml,42S；D3组1.6μg／ml,83S；D4组1.6μg／ml,42S；D5组0.1μg／ml,83S；D6组0.1μg／ml,42S)。 3、分别在每组处理后的10min、30min、1h、2h、4h时间点测定每个小室内单层色素上皮的TER值，每孔测3次。
4、分别在各处理组杯内加入浓度50μg／ml的辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)，之后10min、30min、1h、2h各时间点收集杯外液体50μl，四甲基联苯胺(3,3,5,5-tetramethyl benzidine，TMB)显色，酶标仪测量吸光光度值并计算HRP浓度。
研究结果
1、培养于Millicell-PCF小室内的单层视网膜色素上皮跨上皮电阻值逐渐上升，在约两周时达到顶峰(23.875±2.30)Ω，此后的7-10天内T基本保持稳定，21天时电阻值仍稳定在(21.875±1.55)Ω，之后呈明显下降趋势，24天时检测电阻值为(17.125±1.64)Ω，与14天时相比有统计学差异(p＜0.05)，至一个月左右电阻值已降至和空白对照组相接近。HE染色一周时见细胞散在分布于滤膜表面，局部有融合。二周时滤膜表面细胞已经基本融合，细胞之问连接紧密。四周时细胞密度明显下降。
2、测得10min、30min、1h、2h、4h各时间点每个处理组的跨上皮电阻值，并采用单因素方差分析，结果显示：B组单纯激光照射组各亚组电阻值基本保持稳定，与空白对照组相比各时间点电阻值差异无统计学意义(P＞0.05)，B1、B2组组间差异无统计学意义(P＞0.05)；C组单纯光敏剂作用组中C1组与空白对照组相比各时间点电阻值均有统计学差异(P＜0.0001)，C1组与C2、C3组相比各时间点组间差异有统计学意义(P＜0.0001)；D组PDT作用组各亚组与空白对照组相比各时间点电阻值差异均有统计学意义(P＜0.0001)，其中D1D2组、D3D4组、D5D6组各时间点电阻值两两之间差异有统计学意义，剂量相同两组之间结果差异无统计学意义(P＞0.05)。
3、测定10min、30min、1h、2h各时问点每孔杯外HRP浓度，并采用单凶素方差分析，结果显示：B组单纯激光照射组各组HRP浓度较空白对照组稍高，但与空白对照组相比各时间点HRP浓度差异无统计学意义(P＞0.05)，B1、B2组组间差异无统计学意义(P＞0.05)；C组单纯光敏剂作用组中HRP浓度C1组与空白组及C2、C3组相比各时间点HRP浓度差异均有统计学意义(P＜0.0001)，空白组、C1组、C2组之间HRP浓度差异无统计学意义(P＞0.05)。D组PDT作用组各亚组与空白对照组相比各时间点HRP浓度差异统计学意义(P＜0.0001)，其中各亚组组间差异无统计学意义(P＞0.05)。
结论
1、将视网膜色素上皮细胞培养于微孔滤器中能够成功建立体外单层视网膜色素上皮屏障模型。
2、单纯689nm非热能激光分别照射83S和42S对视网膜色素上皮的屏障功能无明显影响。
3、高浓度单纯光敏剂(2mg／ml)作用即可引起视网膜色素上皮屏障功能迅速破坏，但常规血药浓度(1.6μg/ml)和低于血药浓度(0.1μg/ml)的单纯光敏剂作用并不引起视网膜色素上皮屏障功能的损害。
4、不同的激光照射时问及光敏剂浓度的PDT作用均可引起视网膜色素上皮屏障功能的损坏，其损坏程度主要与光敏剂的浓度相关，而与激光照射时间相关性较小。