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菝葜(Smilax china L.)又名金刚藤,为百合科(Lillacaee)菝葜属的一种多年生落叶攀援灌木,根茎入药,为我国传统中药材,现收载于2010版《中国药典》。菝葜具有祛风利湿,解毒散瘀的功效,其中药制剂有金刚藤胶囊、金刚藤片剂等,临床主要用于治疗妇科炎症疾患,尤其在治疗慢性盆腔炎方面疗效确切。本论文是在活性追踪指导下对菝葜抗慢性盆腔炎有效部位及其化学成分开展研究,以期为菝葜的二次开发提供物质基础和质量保证。国内外有关菝葜生药学、化学成分、药理学及其临床应用的相关文献报道表明,菝葜抗慢性盆腔炎的有效成分可能与菝葜黄酮类化合物及其皂苷类化合物有关,因此,本研究采用系统溶剂法,依次得到三个提取部位,分别为乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水液部位,然后通过大鼠慢性盆腔炎模型来评价菝葜三个提取部位抗盆腔炎的活性作用。具体实验过程为：将0.06mL25%苯酚胶浆注入大鼠右侧子宫,造成大鼠慢性盆腔炎(CPID)模型,观察菝葜各提取部位高、中、低(相当于临床等效剂量的4、2、1倍)三个剂量对CPID模型大鼠血液流变学的影响,探讨菝葜各提取部位对CPID的治疗作用。结果如下,菝葜乙酸乙酯部位的高、中剂量组能非常显著地降低CPID模型大鼠增高的血液流变学指标(P<0.01)；菝葜正丁醇部位高、中剂量组虽亦能降低CPID模型大鼠升高的血液流变学指标,但效果没有乙酸乙酯组明显；菝葜水液组不能降低CPID模型大鼠升高的血液流变学指标。上述结果显示菝葜的乙酸乙酯部位具有明显的抗慢性盆腔炎作用,故确定菝葜乙酸乙酯部位为菝葜抗慢性盆腔炎的活性部位。一般认为乙酸乙酯部位中发挥药效的物质为黄酮类化合物,结合文献综述结论,本论文对菝葜总黄酮的提取工艺进行了研究。实验过程中,以落新妇苷的含量为考察指标,考察影响菝葜总黄酮提取的有关因素,单因素实验结果表明,乙醇浓度、提取时间、提取次数、乙醇用量是影响黄酮化合物提取率的四个主要因素,尤其是乙醇浓度的影响最大。然后采用正交设计实验,以菝葜中三个主要的黄酮化合物落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷的含量为考察指标,对菝葜总黄酮的提取工艺进行优化。结合药效学实验结果,最终确定提取工艺为；提取溶剂为70%乙醇；乙醇用量为1kg药材加乙醇10L；提取2次；提取时间分别为2h、2h。验证实验表明,该提取工艺稳定、可靠,可用于后续菝葜总黄酮的提取。经上述提取工艺得到的菝葜总黄酮为粗品,各类杂质较多,必须进行纯化。为此,本研究通过对多种吸附树脂的静态吸附和动态吸附的考察来筛选适用于纯化菝葜总黄酮粗品的吸附树脂,结果表明,聚酰胺(PA)适用于纯化菝葜总黄酮,并对其纯化总黄酮的相关工艺参数进行了考察,如上样浓度、上样量、乙醇浓度、乙醇洗脱剂用量、洗脱剂洗脱速度。实验中采用紫外可见分光光度法,以从菝葜活性部位中分离得到的一个含量最高的黄酮类化合物落新妇苷为对照品,以洗脱的总黄酮质量和纯度为考察指标,进行了纯化工艺优化。结果表明,选择菝葜总黄酮水溶液上样,其浓度相当于0.25g生药.mL-1,选择80-100目聚酰胺,药液上样后预吸附2h,用水洗脱6BV,15%乙醇洗脱5BV,弃掉洗脱液,然后用50%乙醇洗脱7BV,收集50%乙醇洗脱液,回收乙醇,水液冷冻干燥得菝葜总黄酮样品。纯化后的总黄酮的含量由菝葜乙醇提取液的16%提高到51%,表明该纯化工艺稳定可靠,可用于菝葜总黄酮的纯化。经药理活性研究实验证实,纯化后菝葜总黄酮具有显著的抗慢性盆腔炎作用,据此得到了菝葜抗慢性盆腔炎的有效部位。为了进一步明确菝葜抗慢性盆腔炎的有效成分,本研究对菝葜总黄酮活性部位进行化学成分分离,得到一些单体化合物,为菝葜抗慢性盆腔炎的有效部位药效学研究奠定了物质基础。分离过程中首先以硅胶柱层析法进行粗分,以不同比例的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱,得到不同极性的洗脱物;然后采用高速逆流色谱法(HSCCC)进行细分,具体实验条件如下：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1：10：1：10)为两相溶剂体系,以上相为固定相,下相为流动相,流速1.5mL·min-1,主机转速850rpm,工作温度控制在25℃,检测波长280nm。结果,通过HSCCC,从硅胶柱粗分的两个部位,石油醚：乙酸乙酯=1：3和石油醚：乙酸乙酯=1：4分别得到了4个化合物和2个化合物,通过HPLC面积归一法纯度测定,6个化合物纯度均超过98%,经1H NMR、13C NMR、ESI-MS相关数据并结合文献进行结构分析,6个化合物分别为落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-a-L-吡喃鼠李糖苷、(2R,3R)-3,5,7,3’-catechin-[8,7-e]-4β-(3,4-dihydrox-yphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone、5’-五羟基黄烷、白藜芦醇,其中化合物新异落新妇苷为首次从菝葜中分离得到。为探寻菝葜抗慢性盆腔炎活性部位中的有效单体化合物,本文通过MTT法,观测了上述6个单体化合物不同浓度的药液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用。结果表明,在6个化合物中有5个化合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)有不同程度的抑制作用,分别是落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-a-L-吡喃鼠李糖苷、(2R,3R)-3,5,7,3’-catechin-[8,7-e]-4β-(3,4-dihydroxypheny-1)-dihydro-2(3H)-pyranone、白藜芦醇,说明这5个化合物可能是菝葜抗慢性盆腔炎的有效成分,其作用机制有待进一步研究。为了更好的控制菝葜药材的质量,本研究对菝葜药材中的四个黄酮化合物的含量进行了测定。通过HPLC外标法,同时对菝葜药材中,落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、黄杞苷的含量进行了测定；并采用一测多评法对此四个化合物含量进行了测定。结果表明,外标法测定菝葜药材中落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-Λ-L-鼠李糖苷、黄杞苷的含量分别为8.0mg·g-1、5.mg·g-1、3.5mg·g-1、4.5mg·g-1;以落新妇苷为内标的一测多评法测定4个黄酮化合物的含量,与外标法相比,两者没有显著性的差异。本实验建立HPLC外标法同时测定菝葜中4个黄酮化合物含量简便、准确,同时以落新妇苷为内标的一测多评法测得菝葜中4个黄酮化合物的含量与外标法相比没有显著性差异,可替代外标法用于菝葜药材的质量分析,为全面评价菝葜药材的质量提供了依据。通过聚酰胺树脂纯化的菝葜总黄酮,采用紫外可见分光光度法测定其含量为51%,该法存在准确度不够等不足,为了更加准确测定菝葜抗慢性盆腔炎有效部位中黄酮化合物的含量,本文通过HPLC法,对该有效部位中四个主要的黄酮类化合物的含量进行了测定。结果表明,在该有效部位中,落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-a-L-鼠李糖苷、黄杞苷的含量分别为5.80%、2.05%、2.25%、3.80%,四个黄酮类化合物的总含量为13.90%。通过HPLC法测定有效部位中单个化合物的含量,可更加准确的控制菝葜慢性抗盆腔炎有效部位的质量。