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目的： 利用分子生物学和生物化学等分析手段，主要从蛋白水平对人类NAF-1蛋白进行系统研究，以了解人类NAF-1蛋白[2Fe-2S]簇与Zn2+之间相互作用的特性， NAF-1与DNA之间的相互作用、以及Zn2+对NAF-1与DNA相互作用的影响，从分子水平为Zn对NAF-1功能的调节提供理论基础，并为NAF-1在细胞代谢调节及Zn细胞毒性中的作用提供新的研究方向。 方法： 1. 构建NAF-1、CIAPIN1蛋白表达载体表达相应蛋白 根据NCBI数据库中的信息设计特异性扩增人类Cisd2、CIAPIN1基因的引物，利用无缝克隆技术将目的基因片段连接到质粒上获得重组表达载体。构建成功的重组质粒可在E. coli中表达，通过蛋白纯化系统纯化获得目的蛋白。 2. 蛋白全波长分析和金属含量测定 纯化的蛋白采用紫外-可见分光光度计进行全波长扫描分析蛋白样品的光谱学特点，聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定蛋白纯度；使用ICP-MS（Agilent 8800）仪器检测蛋白中Fe和Zn含量，手工法检测蛋白中S含量。 3. NAF-1蛋白与Zn结合实验及结合位点的定位 IPTG诱导蛋白表达前加入一定浓度的ZnSO4到菌液中，纯化出的蛋白进行全波长扫描、金属含量检测等分析NAF-1是否具备Zn结合活性。构建Cisd2点突变表达载体（4Mut-NAF-1-pCold I、H114C-NAF-1-pCold I），于E. coli中表达相应蛋白，通过全波长扫描、金属含量检测等分析相应位点突变对NAF-1蛋白Zn结合活性的影响。Zn-NAF-1在体外进行铁硫簇组装，探究NAF-1与Zn结合的可逆性。 4. 蛋白质与DNA结合实验以及DNA保护实验 将DNA与蛋白质按一定体系混合后25℃孵育20 min进行结合反应，反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像仪显像分析DNA是否与蛋白发生结合反应。用DNase I对DNA与蛋白质结合反应产物进行消化，消化产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像仪显像分析蛋白质的DNA保护作用。 结果： 1. 菌落PCR鉴定及测序后序列比对验证NAF-1-pCold I、CIAPIN1-pCold I重组表达载体构建成功，在E. coli中诱导相应蛋白表达，并在诱导前向LB培养基中加ZnSO4处理。纯化获得的NAF-1蛋白可结合Zn2+，且蛋白的Fe含量随Zn结合量的升高而降低，而CIAPIN1蛋白在相同实验条件下铁硫簇受Zn2+影响较小。 2. E. coli中表达4Mut-NAF-1、H114C-NAF-1，在LB培养基中加ZnSO4处理后诱导得到的H114C-NAF-1仍可结合Zn且与锌的结合影响自身铁硫簇结合，而相同实验条件下4Mut-NAF-1既无铁硫结合也无锌的结合。 3. Zn-NAF-1在体外进行铁硫簇组装可再次被组装上铁硫簇，而Zn结合量则相应下降。 4. NAF-1体外具备dsDNA结合活性，Zn-NAF-1也可与DNA结合，但其DNA结合活性远不如野生型NAF-1。 5. NAF-1、Zn-NAF-1与dsDNA的结合均可保护dsDNA抵抗DNase I的消化作用，但Zn-NAF-1较野生型NAF-1有更强的dsDNA的保护作用。 结论: 1. 人类NAF-1蛋白具有Zn结合活性，且与Zn的结合位点正是其[2Fe-2S]簇结合位点，Zn与[2Fe-2S]簇对NAF-1同一结合位点的竞争性结合是可逆的。 2. NAF-1体外具备dsDNA结合活性，可一定程度上保护dsDNA抵抗DNase I的消化作用；Zn可影响NAF-1与dsDNA的相互作用，Zn-NAF-1与dsDNA的结合活性远不如野生型NAF-1，但对dsDNA的保护作用却较野生型NAF-1更强。 3. NAF-1作为铁硫蛋白，在生物体内功能的发挥很大程度上依赖于其[2Fe-2S]簇的存在，Zn2+可能在体内通过对NAF-1二铁二硫簇结合位点的竞争性结合参与NAF-1功能的调节，影响NAF-1在细胞内的一些功能发挥，对细胞能量代谢、肿瘤增殖等发挥调节作用。