论文部分内容阅读
第一部分、慢性酒精摄入致大鼠胰岛素抵抗及白藜芦醇的改善作用 目的：以液体饲料为载体，给雄性SD大鼠供给不同剂量的酒精，建立慢性酒精摄入的模型，研究慢性酒精摄入对胰岛素抵抗的影响以及白藜芦醇干预后的改善作用。 方法：60只雄性SD大鼠随机分成以下6组：正常对照组（Con）、低剂量酒精组（Leth,0.8g/kg·bw）、中剂量酒精组（Meth,1.6g/kg·bw）、高剂量酒精组（Heth,2.4g/kg·bw）、白藜芦醇对照组（Con+Res,100mg/kg·bw）和白藜芦醇干预组(Heth+Res，Heth:2.4g/kg·bw，Res:100mg/kg·bw)。每天每只大鼠给予含相应干预物的液体饲料约100mL，并且记录每天的进食量。每周称量大鼠体重，定期观察大鼠的健康状况。21周后进行胰岛素耐量和口服葡萄糖耐量实验，于22周后断头处死大鼠，同时每组随机选取3只在处死前注射胰岛素（0.8U/kg.bw），留取血清及肝脏样本用于检测血糖、血胰岛素、肝糖原以及肝脏中胰岛素信号传导相关分子和SIRT1的蛋白表达情况。 结果： 1.酒精组大鼠的体重和能量利用率低于正常对照组，但不具有显著性差异，白藜芦醇干预后有一定的改善作用； 2.胰岛素耐量实验的结果显示，Heth组的曲线下面积明显高于Con组的曲线下面积（P<0.05），白藜芦醇干预后，能有效降低该面积（P<0.05）； 3.口服葡萄糖耐量实验的结果显示，和Con组对比，Meth和Heth组的曲线下面积均明显增加（P<0.05，P<0.01），白藜芦醇干预后，改善作用明显（P<0.05）；4.酒精作用使得大鼠空腹血糖升高，且Meth和Heth组的升高较明显（P<0.05，P<0.01），使得大鼠HOMA-IR水平随酒精剂量的升高而逐渐升高，且高剂量组有显著性差异（P<0.05），使得大鼠HOMA-β水平均显著较低（P<0.01），白藜芦醇干预具有明显的改善作用。 5.酒精作用使得大鼠肝脏贮存糖原的能力明显降低（P<0.01），白藜芦醇干预后能有效提高肝脏的糖原贮存能力（P<0.05）。 6.酒精作用使得大鼠肝脏中IRS2、PI3K、AKT2和SIRT1的蛋白表达降低，且Meth和Heth组降低较明显（P<0.05，P<0.01），白藜芦醇干预具有明显的改善作用。 结论：慢性酒精摄入能导致大鼠胰岛素抵抗，白藜芦醇干预具有明显的保护作用，且其保护可能与SIRT1被激活有关。 第二部分、酒精致大鼠原代肝细胞胰岛素抵抗及白藜芦醇改善研究 目的：以酒精孵育的大鼠原代肝细胞为研究对象，研究酒精对胰岛素抵抗的影响和白藜芦醇的干预效果，探讨相关机制。 方法：二步胶原酶灌注法提取大鼠原代肝细胞，不同浓度酒精（0，10，25，50，100mM）孵育3h和24h，研究酒精代谢酶蛋白表达的变化情况，从而选择酒精作用合适的浓度和时间来建立胰岛素抵抗模型，并探讨白藜芦醇的改善作用。 结果： 1.不同浓度酒精作用细胞3h和24h后，乙醛脱氢酶2（ALDH2）的变化均不明显，乙醇脱氢酶（ADH）和微粒体中细胞色素P4502E1（CYP2E1）的变化较明显，且25mM酒精在3h和24h时对ADH和CYP2E1的影响均具有显著性的差异（P<0.05，P<0.01）； 2.25mM酒精和0.1μM白藜芦醇分别作用24h均使得大鼠原代肝细胞中p-AKT/AKT的比值降低（P<0.01），但是两者联合作用能够提高p-AKT/AKT的比值； 3.25mM酒精作用24h使得ADH和CYP2E1的蛋白表达增加（P<0.01），白藜芦醇干预后具有明显的改善作用（P<0.05），此外，酒精对ALDH的蛋白表达无明显影响，但是白藜芦醇干预后能有效提高ALDH的蛋白表达（P<0.05）； 4.白藜芦醇能有效激活SIRT1的蛋白表达，显著改善酒精引起的SIRT1蛋白表达降低（P<0.05）。 结论：白藜芦醇对酒精引起的肝细胞中胰岛素抵抗状态具有一定的改善作用，且其改善作用可能是通过改善酒精代谢相关酶的蛋白表达，从而激活SIRT1来完成的,但是白藜芦醇不能提高正常肝细胞的胰岛素敏感性。