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本文分三部分进行论述:
第一部分角膜致病性丝状真菌的基因鉴定与分型。
目的:利用rDNA ITS测序的方法对角膜致病性丝状真菌进行基因鉴定与分型。方法收集2006年1月~2006年12月北京同仁医院眼科中心就诊患者的角膜标本,分离丝状真菌52株,其中镰刀菌属35株,占67.3%;曲霉菌属10株,占18.2%;其他菌属7株,占13.5%。对菌株进行rDNA ITS基因分型及形态学鉴定与分析。
结果:形态学鉴定丝状真菌52株,其中鉴定到属48株(92.3%,48/52),鉴定到种31株(58.6%,31/52)。52株丝状真菌均可通过基因分型鉴定至属和种的水平。基因分型与形态学鉴定一致率为90.3%。根据基因进化的树状图,将52株丝状真菌分为4个进化组。
分析:不同年限的角膜镰刀菌的基因型。根据rDNA ITS基因进化树状图,将其分为3组。2001年的17株镰刀菌在各基因组中的构成百分比为第1组52.9%;第2组11.8%;第3组35.3%。2006年的35株镰刀菌在各基因组中的构成百分比为第1组62.9%;第2组8.6%;第3组25.7%。
结论:rDNA ITS基因分型操作快捷,结果客观、准确,对于少见或鉴定困难的丝状真菌,具有明显的优势。基因分型客服了传统的以主观形态学观察进行鉴定的缺点,并且便于利用网络资源进行菌株信息的交流。
第二部分丝状真菌药敏纸片扩散法与微量稀释法的对比研究。
目的:对比临床常用的纸片扩散法与国际标准的微量稀释法检测丝状真菌体外药物敏感的一致性。用纸片扩散法检测不同基因组丝状真菌的药物敏感性。
方法:用纸片扩散法与美国临床实验室标准化委员会制定的微量稀释法对北京同仁医院眼科中心送检的20株镰刀菌属和18株曲霉菌属进行药敏试验,测定抑菌环和最小抑菌浓度。参试药物包括那他霉素、特比萘酚、两性霉素B、伊曲康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、咪康唑和酮康唑。用纸片扩散法分别检测4个基因组丝状真菌的药物敏感性。
结果:纸片扩散法与微量稀释法对比结果发现:对镰刀菌属两者检测的一致率较高(>80%)的有:那他霉素(100%)、伊曲康唑(100%)、氟胞嘧啶(100%)、两性霉素B(88%)、咪康唑(85%)、氟康唑(85%)酮康唑(80%),一致率较低(<80%)的是特比萘酚(0%);对曲霉菌属两者检测的一致率较高(>80%)的有:氟康唑(100%)、咪康唑(97%)、特比萘酚(94%)、酮康唑(94%)、氟胞嘧啶(83%),一致率较低(<80%)的有:那他霉素(72%)、伊曲康唑(72%)、两性霉素B(67%)。丝状真菌的4个基因组中,第1~3组菌株对那他霉素敏感百分比较高(100%);第3、4组菌株对特比萘酚敏感百分比较高(分别为80%和84.6%)。
结论:纸片扩散法对多数药物的敏感性检测与微量稀释法一致性高。由于纸片扩散法有简便、快速等优点,所以适用于临床眼科实验室的开展。各基因组的丝状真菌对药物的敏感性具有一定的差异。
第三部分角膜致病性丝状真菌的基因型与临床相关性的初步分析。
目的:分析丝状真菌性角膜炎致病菌株的基因型及其临床相关因素。
方法:收集北京同仁医院眼科中心2006年1月~2006年12月病原学诊断为丝状真菌性角膜炎的患者52例,对患者进行治疗和随访,分析基因型与患者的发病时间、诱发因素、病情严重程度、治疗等临床多因素的关系。
结果:将52例患者根据致病菌株的基因型分为4组:第1组22株(20株茄病镰刀菌和2株尖孢镰刀菌);第2组12株(8株串株镰刀菌、3株层生镰刀菌和雪腐镰刀菌1株);第3组5株(4株少见眼部真菌和1株串株镰刀菌);第4组13株(10株曲霉菌属和3株链隔孢属)。以茄病镰刀菌为主要致病菌的第1组22例患者具有明显的临床特点:多数无明确的诱因,发病较急,角膜溃疡的侵润程度较重,药物治愈率较低;其差异有统计学意义。
结论:由不同基因型的丝状真菌引起的角膜炎其临床特点具有一定的差异。由于感染性角膜炎同时受到多方面的影响,临床还应结合宿主免疫等因素进一步分析。