产共轭亚油酸瘤胃细菌的筛选与鉴定

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本研究通过亨盖特厌氧操作方法从反刍动物牛、羊的瘤胃内容物中分离瘤胃细菌,采用紫外光谱法和气相色谱结合法,从分离出的瘤胃细菌中筛选产cis9,trans11-CLA和trans 10, cis12-CLA这两种具有生理活性共轭亚油酸异构体的菌株;并通过形态特征观察、16S rDNA序列分析、脂肪酸组成分析以及生理生化特征测定,对筛选出的菌株进行分类鉴定。研究结果如下:(1).从中国农业大学动物科技学院养殖实验基地和内蒙古鄂尔多斯采集9个瘤胃内容物样品,通过亨盖特厌氧操作方法分离瘤胃细菌,经滚管培养得到58株瘤胃细菌纯培养。这58株瘤胃细菌的菌落颜色以白色为主,少数为黄色;菌落大小均较小,菌落直径为1-5mm;菌落形状以光滑的圆形为主,少数为不规则形状。(2).采用紫外光谱法初筛,从分离到的58株瘤胃细菌中筛选到8株具有产共轭亚油酸的能力的菌株。其中有4株在波长为232nm的紫外区有吸收峰,3株在233nm处有吸收峰,另外1株的吸收峰在234nm处。8个菌株吸收峰的OD值为0.4-0.9,最高的是菌株7512,吸收峰的OD值为0.8086。(3).运用气相色谱法复筛,从紫外分光光度法筛选出的8株瘤胃细菌中筛选产cis9,trans11-CLA和trans 10, cis12-CLA这两种具有生理活性共轭亚油酸异构体的菌株。实验结果显示,8株瘤胃细菌有具有产cis9, trans11-CLA和trans10, cis12-CLA的能力,产量最高的是菌株111,cis9, trans11-CLA和trans 10, cis12-CLA产量分别为141.7μg/mL和127.5μg/mL。(4).在MRS固体培养基上观察了8株产共轭亚油酸瘤胃细菌的菌落形态特征,并进行细胞革兰氏染色,电子显微镜扫描观察细胞形态特征。实验结果显示,8株产共轭亚油酸瘤胃细菌都为革兰氏阳性,菌落颜色均为白色;菌落形状多为圆形,少数为不规则形状;菌落边缘以整齐光滑居多,少数呈波浪状;菌落直径为1-5mm;8个菌株的细胞形态均为球状,菌体直径为0.5-1.0μm。(5).根据16S rDNA序列分析、脂肪酸组成分析以及生理生化特征测定结果,初步确定筛选出的8株产CLA瘤胃细菌均为婴儿链球菌(Streptococcus infantarius)。
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