HPLC分析烟草化学成分及香精指纹谱图基础研究

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采用80%甲醇水为萃取液,60℃下超声萃取10 min从烟草等天然产物中提取咖啡酸。采用Waters Symmetry C18柱,以0.1%甲酸及乙腈为流动相,梯度洗脱,流速:0.8 mL/min,柱温40℃,UV 330 nm检测,内标法定量测定咖啡酸含量。蒲公英测定采用了硝基苯为内标物,标准工作曲线Y=30.399X-0.117,R~2=0.9998。烟草、咖啡、金银花、贡菊中的咖啡酸含量均采用香豆素为内标物,标准工作曲线Y=3.5874X-0.0195,R~2=0.9999。方法的加标回收率为98.4~95.7%;测定结果的RSD<3.3%(n=5)。以加速溶剂萃取-微波辅助提取-低温醇析-低温干燥法从烟草中提取果胶,在120℃下用2 mol/L TFA对烟草、烟草果胶及苹果果胶酸解2h,采用ABEE对酸解液70℃衍生50 min。衍生化产物采用Waters Symmetry C18柱,以A:pH=4.0 50 mmol/L乙酸铵溶液,B:乙腈/甲醇=2/1为流动相流动相,梯度洗脱,流速:0.8 mL/min,柱温45℃,UV 307nm检测,内标法定量分析。半乳糖醛酸的标准曲线Y=6.0438X-0.0009,R~2=0.9998,葡萄糖的标准曲线Y=6.6714X+0.6811,R~2=0.9993,甘露糖的标准曲线Y=7.5865X+0.0756,R~2=0.9997,木糖的标准曲线Y=8.7248X+0.1004,R~2=0.9997。烟草果胶中半乳糖醛酸测定值为15.88%,烟草样品中测定的半乳糖醛酸含量为20.22 mg/g,确定烟草样品中果胶含量为12.73%。烟草酸解液中半乳糖醛酸及几种单糖的测定值RSD=1.34~2.98%,半乳糖醛酸的回收率为98.38%。对烟用香精香料的高效液相指纹图谱重点研究了HPLC分析方法稳定性,2种香精与2种料液的日内与日间的保留时间RSD<1%,含量RSD<6%,完全满足烟用香精香料品控技术体系研究中高效液相指纹色谱峰变化率小于10%的要求。本文所获得的结果为研究烟草品质与烟草化学的关系提供了基础分析方法;咖啡酸与果胶的提取方法为烟草工业的废弃物资源化处理提供了有益的参考与借鉴;烟用香精料液指纹图谱分析方法基础研究为产品质量控制提供了可靠的分析方法。
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