【摘 要】
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本文探讨并初步建立了以耐药机制明确的大肠埃希菌为靶点的专门用于筛选对氨基糖苷类抗生素钝化酶稳定的抗菌药物的新型筛选模型.该模型还可用于对新药作用机制的评价和己知
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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本文探讨并初步建立了以耐药机制明确的大肠埃希菌为靶点的专门用于筛选对氨基糖苷类抗生素钝化酶稳定的抗菌药物的新型筛选模型.该模型还可用于对新药作用机制的评价和己知抗菌药物应用前景的进一步评估.我们在对1998至2003年国家耐药监测中心收集的临床分离菌对氨基糖苷类抗生素耐药性调查和耐药机制分析的基础上,以大肠埃希菌作为研究对象,将临床分离菌对氨基糖苷类抗生素最主要的耐药机制-钝化酶作为药物筛选靶点.分别使用微量肉汤稀释法和巢式PCR,对临床收集的64株用纸片法测定耐药的大肠埃希菌对16种氨基糖苷类抗生素的MIC值和钝化酶基因进行调查,结果显示:临床大肠埃希菌中存在aac(3)-Ⅱc、aac(6)-Ⅰb、ant(2")-Ia和ant(3")-Ia 4种耐药基因,aac(3)-Ⅱc和aac(6)-Ib是主要的产酶基因.约40%的耐药菌中存在2种或2种以上的钝化酶基因.测试菌株的耐药表型较为复杂,与钝化酶基因表达有关但不是一一对应,这可能与菌株内还存在其他耐药机制有关.根据耐药菌的耐药谱和基因特征,选取7株耐药基因单一、耐药谱与钝化酶水解底物对应的菌株和1株不含钝化酶基因的耐药菌为对照,组建特征耐药菌库.为了简化筛选特征菌的实验,采用聚类分析对分离菌的MIC数据进行分类,并探讨了这种基于数值的分类方法在耐药性分析和筛选特征菌中的应用.以8株特征菌株为筛选对象,对比纸片扩散法和微量肉汤稀释法对实际样品的筛选阳性率和影响因素,建立了以微量肉汤稀释法为筛选手段的药物筛选模型.在对960份发酵样品的筛选中,发现1份含有较高活性成分的发酵液.对该样品具体的理化性质分析和特征菌库的完善尚需要一定的后续工作.
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