单抗竞争ELISA快速检测肠炎沙门氏菌方法的建立

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:liongliong533
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本研究从已建立的抗沙门氏菌单抗中筛选出适用于肠炎沙门氏菌ELISA快速检验的3—47—26单抗,采用筛选强阳性杂交瘤细胞株制备了高效价的3—47—26单抗。改进了用辣根过氧化物酶标记高效价单抗的方法,进行了HRP标记单抗的免疫生物学特性的鉴定。提取制备了肠炎沙门氏菌脂多糖,并对蛋白质和糖的含量进行了测定,提取液中蛋白质含量为0.17mg/ml,多糖含量为136.6ug/ml。确定了包被浓度和酶标抗体的工作浓度:HRP—3—47—26为1∶100;LPS的包被浓度为400ng/ml。 试验中采用LPS与多聚赖氨酸的结合,解决了包被过程中的解吸附作用,增强了包被的稳定性,同时也减少了假阳性反应,优化了包被过程。建立了检测肠炎沙门氏菌的抗原竞争ELISA方法,利用样品中的LPS抑制酶标抗体与包被的LPS结合,以降低底物反应的颜色从而达到检测的目的。通过对210份肠炎沙门氏菌感染鸡泄殖腔棉拭子、羽毛和组织样品先筛选后鉴定的方法进行检测具有明显的抑制作用,通过与国标法对大量的样品检测结果比较表明,竞争ELISA方法的检出率为18.09%;检出阳性样品36份,国标法检出率为17.14%;两者符合率为97.14%。竞争ELISA敏感性和特异性分别为94.4%和97.7%。从而为肠炎沙门氏菌的检测提供了一种敏感、特异、快速的检测方法。 通过以上研究工作,初步确定了肠炎沙门氏菌的ELISA检测程序,其方法的试验条件还有待进一步完善和标准化,以便为试剂盒的研制打下基础。
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