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牙周炎是以牙周袋形成、袋壁炎症、牙槽骨吸收、牙齿松动为主要特征的口腔科常见病，是导致成年人牙齿丧失的主要原因。中药治疗牙周炎有着悠久历史，多年来我科发现肾精亏虚型牙周炎患者的比例占绝大多数，应用补肾活血固齿方治疗该型牙周炎患者，疗效显著，但其作用机理不明了。根治牙周炎的关键是通过成骨细胞和破骨细胞的调节作用阻止牙槽骨吸收或促进牙槽骨的再生。补肾活血固齿方对成骨细胞是否有作用，机制如何，有待研究。离体成骨细胞培养技术，为药物研究提供了一种有效的方法。骨钙素(osteocalcin，OCN)是成骨细胞特异合成和分泌的一种非胶原骨蛋白，其生理功能是保持骨的正常矿化，被认为是成骨细胞分化的主要指标，也是骨形成或骨转换的重要标志。本研究从补肾活血固齿方对成骨细胞增殖分化及超微结构的影响，探究中药治疗牙周炎的作用机制，为临床应用补肾活血固齿方治疗牙周炎提供理论依据。 目的:通过在倒置显微镜下观察补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞MC3T3-E1细胞形态的影响，流式细胞术检测补肾活血固齿方对MC3T3-E1增殖的影响，透射电镜观察补肾活血固齿方对MC3T3-E1超微结构的影响以及125I放射免疫法检测补肾活血固齿方对OCN水平的影响，研究补肾活血固齿方对成骨细胞增殖、分化影响，探究中药治疗牙周炎的作用机制。 方法: 1.体外培养MC3T3-E1。 2.补肾活血固齿方按体表面积折算等效剂量灌胃大鼠，制备含药血清;生理盐水灌胃大鼠，制备无药血清作为对照组，10％胎牛血清为空白对照组。 3.用10％含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3-E1细胞24h、48h、72h，倒置显微镜下观察补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞形态的影响。 4.用10％含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3-E1细胞，流式细胞仪检测24h、48h、72h时细胞周期变化。 5.分别用10％无药血清及含药血清培养MC3T3-E1细胞14d后，透射电镜下观察此时细胞超微结构。 6.用10％含药血清、无药血清、胎牛血清分别培养MC3T3-E1细胞，检测24h、48h、72h时细胞上清液中OCN的含量。 结果: 1.补肾活血固齿方对MC3T3-E1形态无明显影响。 2.含药血清对细胞的增殖无明显影响(p＞0.05)。 3.经无药血清作用14天MC3T3-E1呈前成骨细胞样表型，细胞质内细胞器高尔基体、线粒体、内质网不发达。MC3T3-E1经含药血清作用14天，呈成骨细胞样表型，细胞表面突起较多，细胞质内细胞器高尔基体、内质网和线粒体发达，具有良好的的分泌功能，细胞代谢活跃。 4.MC3T3-E1经含药血清、无药血清、胎牛血清组分别作用后，含药血清组细胞上清液中OCN水平增加(p＜0.05)。并且随着作用时间的延长，药物作用效果显示出时间依赖效应。 结论: 1.补肾活血固齿方对MC3T3-E1的形态无影响，对MC3T3-E1的增殖无影响。MC3T3-E1经补肾活血固齿方作用后，其超微结构呈成骨细胞样表型。 2.补肾活血固齿方时间依赖性增加MC3T3-E1的OCN水平。补肾活血固齿方可能通过促进成骨细胞分泌合成OCN，促进成骨细胞分化成熟，促进骨的形成，通过促进牙槽骨的再生而发挥药物作用。