论文部分内容阅读
目的对比Brn-3a与Thy-1.1标记大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的特点及计数差异，评估Brn-3a是否可作为一种可靠的内源性标记物，标记并计数大鼠RGCs。方法20只SD大鼠，随机选取大鼠一眼为Thy-1.1组，另一眼作为Brn-3a组,过量麻醉处死，行3点钟位缝线标记,立即摘除眼球，浸泡于4%多聚甲醛的固定液中。48h后沿角巩膜缘切除眼前节，剥离晶状体，余下部分逐节脱水、透明、石蜡包埋，于视乳头颞侧旁开1mm，做4μm切片，烘干备用，做视网膜石蜡切片，常规苏木素-伊红染色镜下观察RGCs的形态，运用免疫组织化学法检测Brn-3a与Thy-1.1的表达情况，每只眼球取1张切片，在每张待测视网膜切片上，以视网膜后极部中点为起点，至近角膜缘视网膜止点处，将视网膜分为三等份，即中央区、中间区及周边区，每个区域视网膜随机取5个高倍视野，分别计数Thy-1.1、Brn-3a阳性细胞均数。结果光镜下正常大鼠的视网膜从内向外依次为神经节细胞层(GCL)、内核层(INL)、外核层(ONL)。GCL的细胞呈单层排列，较为整齐，胞核清楚数目相对较少，INL和ONL呈多层排列，且细胞排列紧密，数目相对较多。两种标记物染色都仅仅存在于视网膜的GCL，但在大鼠RGCs中分布呈明显差异：Brn-3a主要在胞核中着色，Thy-1.1主要在胞浆中着色；运用此两种标记物标记计数RGCs,中央区Thy-1.1组(n=20)和Brn-3a组(n=20)分别是29.75±2.02（个/高倍视野）和29.46±1.25（个/高倍视野），中间区Thy-1.1组(n=20)和Brn-3a组(n=20)分别是24.72±1.10（个/高倍视野）和24.43±1.66（个/高倍视野），周边区Thy-1.1组(n=20)和Brn-3a组(n=20)分别是21.79±1.25（个/高倍视野）和21.84±1.37（个/高倍视野）,各个相同区域内Thy-1.1和Brn-3a阳性细胞计数比较，差异均无统计学意义（P>0.05)。Thy-1.1组中央区、中间区和周边区两两比较，差异均有统计学意义（P <0.05），Brn-3a组中央区、中间区和周边区两两比较，差异均有统计学意义（P <0.05）。结论在大鼠视网膜中Brn-3a阳性细胞仅存在于视网膜的GCL，主要在胞核中着色。与Thy-1.1标记大鼠RGCs比较, Brn-3a标记的数量基本相当。Brn-3a可以作为一种比较可靠的内源性标记物，标记并计数大鼠RGCs。