【摘 要】
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CEA(carcinoembryonic antigen)即癌胚抗原,是一种高度糖基化糖蛋白,是一种肿瘤相关抗原(TAA:TumorAssociatedAntigen).在消化系统癌症患者(如结肠癌、胃癌、胰腺癌、胆管癌
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CEA(carcinoembryonic antigen)即癌胚抗原,是一种高度糖基化糖蛋白,是一种肿瘤相关抗原(TAA:TumorAssociatedAntigen).在消化系统癌症患者(如结肠癌、胃癌、胰腺癌、胆管癌患者)体内,CEA水平明显提高;肝癌、肺癌、肾癌、乳腺癌、卵巢癌患者体内,CEA水平也可见增高,肺癌腹水中也可以检测到CEA.作为导向药物载体(携带具有细胞杀伤活性的同位素、化疗制剂、毒素、药物前体)抗CEA抗体已被广泛用于肿瘤的导向治疗研究.T淋巴细胞的双信号激活理论的建立为T细胞活化提供了一个机制模型.根据这一模型,抗原特异性的T细胞的活化"同时"需要两种信号:抗原特异性的第一信号和辅刺激信号(第2信号).第一信号由抗原肽-MHC复合物与TCR/CD3复合物的相互作用提供;而辅刺激信号由位于APC细胞表面的辅刺激信号分子与位于T细胞表面的相应受体的相互作用提供.在已发现的辅刺激信号中,B7-CD28是最重要的一类.抗TAA×抗CD3双特异抗体通过激活杀伤性T细胞而发生肿瘤杀伤作用,是免疫治疗中非常有前景的方法.然而由于其缺乏共刺激信号,激活的T细胞往往会导致凋亡.为了更有效地杀伤肿瘤细胞,该文设计并构建抗CEA-抗CD3-抗CD28VH单链三特异抗体(CEA-TsAb).它具有抗CD3和抗CD28VH双信号充分激活杀伤性T淋巴细胞,抗CEA抗体可以靶向CEA阳性的肿瘤细胞,对肿瘤细胞进行有效杀伤.将CEA-TsAb的表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)Star菌株,进行了包涵体表达和胞内可溶表达的研究.该文对可溶表达的CEA-TsAb进行初步纯化.Elisa及流式细胞仪检测结果显示CEA-TsAb与CEA阳性的SW1116细胞的膜抗原,Jurkat细胞表面的CD3分子以及CD28纯抗原均有较强的结合活性.并在此基础上进一步检测了其与12种肿瘤细胞结合特异性.利用MTT方法检测了CEA-TsAb介导T淋巴细胞杀伤结肠癌细胞SW1116的活性.最后采用荧光显微镜和FACS来观察和检测肿瘤细胞坏死和凋亡的产生情况和相互比例,来阐明其杀伤机制.为进一步肿瘤免疫治疗的临床研究打下基础.
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