论文部分内容阅读
研究背景和目的ALI/ARDS是以顽固性低氧血症和进行性加重的呼吸困难为特征性临床表现的一组综合征,其主要的病理特点是炎症细胞浸润,弥漫性肺泡上皮细胞及肺泡毛细血管内皮细胞损伤,肺间质水肿及肺泡透明膜形成。目前ALI/ARDS不仅发病率高,死亡率也居高不下,所以对其发病机制进行全面而深入的阐述,为临床诊治提供理论依据是很有必要的。炎症反应的爆发和失控是其发病的核心环节,中性粒细胞是炎症反应的主要效应细胞。前期研究已证实,Th17细胞主要效应因子IL-17有募集和活化中性粒细胞的效应,Th17细胞介导的免疫应答参与ALI/ARDS的发病。Wnt/β-catenin通路与Th17细胞的分化及急性肺损伤密切相关。故本研究拟探讨ALI时肺部Wnt/β-catenin通路与Th17细胞介导的免疫应答及炎症反应的关系,为ALI/ARDS的治疗提供新的靶点。方法1.用C57BL/6小鼠构建ALI动物模型,在急性期选取5个时间点观察ALI时肺部病理改变,BALF中参与炎症反应的主要效应细胞中性粒细胞及主要炎症因子IL-6、TNF-α含量的变化,肺组织中Wnt/β-catenin通路核心分子β-catenin基因表达的变化。2.在构建的ALI小鼠模型上分别应用Wnt/β-catenin通路激动剂Li Cl、抑制剂Dkk-1干预,对炎症反应及Th17细胞免疫应答相关指标进行检测,观察Wnt/β-catenin通路对ALI小鼠肺部Th17细胞免疫应答及炎症反应的影响。3.用辅助转录因子p300的抑制剂C646干预ALI小鼠模型,通过对Th17细胞分化相关指标的检测,进一步探讨Wnt/β-catenin调控Th17细胞免疫应答的分子学机制。结果1.在ALI小鼠中,LPS刺激后6小时出现肺部炎症损伤及参与肺部炎症反应的主要效应细胞中性粒细胞及促炎因子TNF-α、IL-6水平的增高。2.在ALI小鼠中,肺部Wnt/β-catenin通路中的核心分子β-catenin的基因表达明显增高。3.激活Wnt/β-catenin通路后,ALI小鼠肺部中性粒细胞数量、MPO活性、促炎因子TNF-α及IL-6含量增高,炎性损伤加重;抑制Wnt/β-catenin通路后,ALI小鼠肺部中性粒细胞数量、MPO活性、促炎因子TNF-α及IL-6含量均降低,炎性损伤减轻。4.激活Wnt/β-catenin通路后,ALI小鼠肺部Th17细胞占CD4+T细胞百分比增高、RORγt基因表达增强,BALF中IL-17浓度增加;抑制Wnt/β-catenin通路后,ALI小鼠肺部Th17细胞占CD4+T细胞百分比降低、RORγt基因表达下降,BALF中IL-17浓度减少。5.激活Wnt/β-catenin通路后再选择性抑制p300,ALI小鼠肺部Th17细胞占CD4+T细胞百分比降低、RORγt基因表达下调,BALF中IL-17浓度下降。结论1.Wnt/β-catenin通路参与了ALI肺部炎症反应的发生发展。2.Wnt/β-catenin通路对Th17免疫应答的调控是其参与ALI肺部炎症反应的发生发展的一个机制。3.p300可能参与了Wnt/β-catenin通路对Th17细胞分化的调控。