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目的:通过建立受体酪氨酸激酶样孤独受体2(receptor tyrosine kinnase-like orphan receptor2,Ror2)沉默的大鼠牙槽骨骨髓间充质干细胞(rat alveolar bone marrow mesenchymal stemcells,rBMSCs),研究Ror2沉默及Ror2/Wnt5a对大鼠BMSCs成脂相关基因表达的影响。解析Ror2对BMSCs体外成脂分化的调控机制,为防治颌骨骨质疏松找到新的治疗靶点。 方法:取SD大鼠牙槽骨在无菌条件下进行分离、使Ⅰ型胶原酶与Dispase酶混合液消化后培养BMSCs,并使用流式细胞术进行鉴定。构建慢病毒空载体pGreenpuro-NC和含有靶向Ror2mRNA的shRNA序列的PGreenpuro-shRor2载体,将BMSCs分为三组,对照组、空载体组和Ror2沉默组,稳定转染BMSCs后获得稳定的Ror2沉默细胞。用油红O染色检测三组细胞的成脂分化情况;RT-qPCR检测三组细胞中Wnt5a、FABP4、LPL和PPAR-γ等成脂分化相关因子的mRNA表达情况。 结果:流式细胞仪鉴定结果显示CD90和CD73的阳性率为95.61%,CD45表达率低于2%,表明原代培养的细胞即为骨髓间充质干细胞。PCR电泳鉴定慢病毒载体构建成功;BMSCs经Ror2沉默慢病毒转染后,油红O染色检测细胞成脂分化结果为阳性;RT-qPCR检测显示Ror2沉默BMSCs能有效的沉默Ror2基因的表达(P<0.05),明显上调PPAR-γ、FABP4和LPL的表达(P<0.05),但未能明显下调Wnt5a基因的表达(P>0.05)。 结论:1)研究成功构建了Ror2沉默基因重组载体,以之转染大鼠牙槽骨BMSCs使基因有效沉默;2)Ror2沉默可有效上调BMSCs内成脂因子PPAR-γ、FABP4和LPL的表达,促进其脂向分化;3)BMSCs内Ror2基因沉默技术希望给骨质疏松治疗提供潜在的靶点和新的策略。