葡萄醛脱氢酶基因ALDH2B8表达及功能研究

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葡萄是世界性的重要水果。全球水资源匮乏,加上环境污染、土地盐碱及荒漠化严重,对葡萄及至整个作物的产量和品质造成了严重的影响。植物在遭受干旱、盐等非生物逆境胁迫时会产生大量的醛类物质,从而对细胞造成不可逆的伤害。依赖于NAD(P)+的醛脱氢酶(Aldehyde Dehydrogenase, ALDH)能将细胞内的醛类物质不可逆的氧化为对应的羧酸,从而减轻高活性醛类分子对植物造成的伤害,这在植物抵御逆境胁迫起着非常重要的作用。醛脱氢酶家族在植物抗逆中的功能在拟南芥、水稻、大豆上已得到验证。但关于葡萄醛脱氢酶基因功能研究还少见报道,本研究从葡萄中分离盐胁迫响应基因ALDH2B8,并对其表达及功能进行了分析。取得的主要成果如下:1.采用实时定量PCR技术分析ALDH2B8在欧美杂种葡萄巨峰受盐胁迫后叶片中的表达情况。结果表明ALDH2B8在巨峰叶片中受盐胁迫诱导先上调表达,再回到正常水平,上调表达最大值出现在胁迫处理后3h,胁迫后3h、6h和12h的表达量都显著高于对照,胁迫后24h至48h表达量下降,和对照无明显差异。实时定量PCR分析ALDH2B8在欧美杂种葡萄巨峰不同组织表达结果表明,ALDH2B8在果实中表达量最低,在花中表达量最高,在根、茎、叶、卷须中次之。2.采用同源序列法设计引物克隆获得葡萄ALDH2B8完整的开放阅读框,其长度为1617bp,编码538个氨基酸。该基因核苷酸序列与已公布欧洲葡萄ALDH2B8序列同源性为99.63%,氨基酸序列同源性为100%。氨基酸序列同源性分析表明:葡萄ALDH2B8与中国野葡萄华东葡萄醛脱氢酶ALDH2B4(GenBank登录号:AAZ79355)的同源性为79.11%,与玉米醛脱氢酶(GenBank登录号:NP001105891)的同源性为75.89%,与水稻醛脱氢酶(GenBank登录号:NP001105891)的同源性为71.61%,与人醛脱氢酶(GenBank登录号:AAT41621)的同源性为53.21%。3.采用PEG介导的瞬时转化技术检测ALDH2B8在拟南芥原生质体中的定位。结果表明,ALDH2B8定位于线粒体。4.采用农杆菌介导法获得转化葡萄ALDH2B8基因的拟南芥株系,转基因拟南芥能提高对氧化胁迫抗性,能在盐胁迫下延长生命周期。进一步研究发现该抗性与活性氧及丙二醛含量降低有关。
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