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糖尿病是继心血管疾病、癌症之后严重危害人类健康的第三大疾病，治疗该病常采用的方法有药物治疗、胰岛素注射和胰岛移植，临床上大多数患者常选择前两种方法，这主要是因为选用胰岛移植虽然能根治糖尿病，但是供体数量远远不足，那么，得到足够数量的移植用胰岛就显得尤为重要。研究表明，胰腺干细胞（Pancreas Stem Cells，PSCs）在体外诱导为胰岛样细胞团，并有胰岛素分泌功能，那么，对于PSCs的体外分离、培养与生物学特性的研究将为其作为种子细胞，移植治疗糖尿病有着重要意义，所以本研究以新生大鼠和小鼠为材料，进行PSCs体外分离、培养与鉴定，并检测其胰岛素的分泌，初步探讨枸杞提取物和枸杞多糖在细胞水平对胰腺干细胞增殖和胰岛素分泌的影响，为PSCs作为种子细胞应用于临床糖尿病的治疗提供参考。通过试验获得以下结果：
1． PSCs体外培养体系的筛选
将获得的原代新生大鼠胰腺源性细胞以相同细胞密度分别接种于A(RPMI1640+5%FBS+10 ng/mL EGF+10 ng/mL bFGF)、B(RPMI1640+5%FBS)、C(RPMI1640+10%KSR+10 ng/mL EGF+10 ng/mL bFGF)和D(RPMI1640+5%FBS+等体积的含bFGF、LIF的条件培养液)4种培养液进行培养。培养24 h后进行细胞形态学观察发现，A液中，细胞大部分呈成纤维生长，贴壁率达90%以上，B液中，细胞的贴壁率只有50%左右，C液中，细胞贴壁呈集落样生长，贴壁率约为10%左右，D液中贴壁率约为30%左右。利用MTT绘制这4种培养液中细胞的生长曲线，其结果与观察到的细胞生长状态一致。这表明A液较其它培养液更适合于胰腺源性细胞在体外的生长增殖，其后试验将以A液作为PSCs的培养用液。
2．大鼠PSCs的分离、培养与鉴定
利用组织块法分离新生大鼠胰腺源性细胞，在A液中进行培养、免疫组化分析、诱导为胰岛样细胞团行DTZ染色分析，结果发现，胰腺源性细胞呈Nestin、PDX-1、GLUT-2染色阳性，经10 mmol/L NIC诱导4 d后细胞呈圆形，20 d后细胞被诱导成胰岛样细胞团，经DTZ染色呈阳性，并对其上清进行C肽分析，初步试验结果表明，枸杞子提取物和枸杞多糖对大鼠PSCs具有促生长和促胰岛素分泌作用。对其进行传代建系，最高传至11代。
3．小鼠PSCs的分离、培养与鉴定
利用组织块法分离新生小鼠胰腺源性细胞，在A液中进行培养、免疫组化分析、诱导为胰岛样细胞团行DTZ染色分析，结果发现，胰腺源性细胞呈Nestin、PDX-1、GLUT-2染色阳性，经10 mmol/L NIC诱导成胰岛样的细胞团，经DTZ染色呈阳性，这表明分离获得的新生小鼠胰腺源性细胞为PSCs，在体外最高传至12代。