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目的 探讨RNA干扰技术沉默Notch(1)基因对人神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)Tet21N细胞增殖和MYCN转录的影响;阐明骨髓微量残留病灶(minimalresidualdisease，MRD)检测方法及其结果对高危神经母细胞瘤患儿预后的影响。 方法 1、以神经母细胞瘤细胞株Tet21N为细胞模型，利用该细胞为强力霉素调控MYCN表达细胞，即仅在缺乏强力霉素或四环素的情况下表达MYCN，利用pGIPZ慢病毒载体的shRNA干扰Notch1信号途径，通过CCK8法测定细胞增殖、BrdU标记法细胞周期测定，研究Notch1沉默的Tet21N细胞增殖及细胞周期的改变;通过染色质免疫共沉淀—实时荧光定量PCR法研究Notch1沉默对MYCN转录的影响。 2、应用CD45-FITC/CD81-PE/CD56-PECy5单抗组合通过流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测了人神经母细胞瘤细胞株TGW的免疫表型并确定本实验室FCM检测MRD的敏感度为1×10-4;对57例Ⅳ期骨髓浸润神经母细胞瘤患儿治疗前及化疗4个疗程后骨髓标本进行FCM检测CD45-/CD81+/CD56+细胞阳性率，并分析MRD检测的临床预后价值。 结果 1、利用pGIPZ慢病毒载体的人Notch1shRNA干扰神经母细胞瘤细胞株Tet21N的Notch1信号途径建立稳定的Notch1沉默的Tet21N细胞系，由实时荧光定量PCR及WesternBlot技术在mRNA和蛋白水平证实，从而获得可分析Notch1沉默的神经母细胞瘤Tet21N细胞模型。 2、通过CCK8法细胞增殖检测发现Notch1-Tet21N细胞较Notch1+Tet21N增殖快。通过BrdU标记法细胞周期测定发现Notch1-MYCN+细胞较Notch1+MYCN+Tet21N细胞S期比率高(30％vs.16.3％);Notch1-MYCN-细胞较Notch1+MYCN-Tet21N细胞S期细胞比率高(1.98％vs.10％)。 3、通过染色质免疫共沉淀—实时荧光定量PCR法对MYCN启动子及其下游基因进行检测，结果提示Notch1沉默使Tet21N细胞MYCN转录下调。 4、比较了57例初诊时FCM检测骨髓MRD阳性患儿平均化疗4个疗程后MRD结果与预后关系，57例患儿5年无事件生存率为22.4％，平均生存时间34.6个月(7～69月，95％CI27.8～41.3)。化疗4个疗程后30例患儿MRD转阴，其中10例复发(33.3％)，随访时间45.5个月（7～69月，95％CI35.3～55.8）;另外27例患儿化疗4个疗程后MRD仍为阳性，其中20例患儿复发或进展(74.1％)，随访时间24.2个月（8～48月，95％CI18.9～29.5），两组差异有统计学意义(P=0.002)。 结论 1、Notch1沉默促进神经母细胞瘤Tet21N细胞增殖和细胞周期的进展，Notch1沉默抑制Tet21N细胞MYCN的转录。 2、运用流式细胞术检测神经母细胞瘤患儿骨髓中的MRD敏感度高，骨髓中MRD残留与高危神经母细胞瘤患儿预后相关。