论文部分内容阅读
本文对RNAi技术阻断多药耐药基因表达提高乳腺癌化疗敏感性进行了探讨。本研究选用耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF7/ADR及其药物敏感细胞系MCF7作为研究对象。设计合成一对针对mdr1基因的shRNA，定向克隆入真核表达载体pENTR/U6，构建pENTR/U6 MDR1重组质粒，然后转化质粒到大肠杆菌中，经过克隆、扩增、纯化后慢病毒包装，转染进MCF7/ADR细胞；空载体pENTR/U6转染作为对照，10μg/ml Blasticidin筛选2周，存活的转导细胞为筛选的靶基因沉默细胞，用流式细胞术从蛋白水平检测P-gp的表达率，罗丹明试验测定P-gp功能变化，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析，从基因转录水平检测MDRl基因的表达率，MTT法检测阿霉素对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50)。研究表明：经RNAi后，MCF-7/ADM细胞系mdr1mRNA表达下降，p-gp表达水平下调，MTT法测试对ADM敏感性增加。shRNA能抑制人乳腺癌多耐药细胞系MCF7/ADR内MDR1基因表达，从而为逆转肿瘤细胞的耐药性提供了一种新的方法。