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帕金森病(Parkins on’s dis e a s e,PD),是一种中老年人常见的神经系统变性疾病。临床主要表现为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态异常等症状。PD是以中脑黒质致密部投射到纹状体壳核和尾状核的多巴胺能(Dopamine r gic,DA能)神经元变性缺失和路易小体(Lewy body,LB)形成为病理特征,而黒质DA能神经元的选择性渐进性死亡正是PD发病的根本原因。治疗PD的关键是有效保护DA能神经元减少及死亡。目前PD的治疗主要以左旋多巴等药物治疗为主,然而长期用药会出现疗效减退、异动症甚至是左旋多巴衰竭综合征等棘手的临床问题,至今还无法得到满意的解决。因此目前迫切需要寻找和研发更为理想的新型抗PD药物,以替代和弥补已有药物的缺陷和不足。探索相关保护性药物的研究具有重要意义。PD的主要病理改变是黑质D A能神经元进行性变性死亡。虽然现有研究已经发现基因突变、线粒体功能障碍、炎性反应等诸多方面参与其中,但是其确切的发病机制迄今尚未明了。大量的研究表明c-Jun氨基末端激酶3(c-Jun N-termina l kinase 3,JNK3)的过度激活参与黑质D A能神经元凋亡,是DA能神经元变性死亡的重要原因之一。因此,jnk3有可能成为pd治疗的新靶点。细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosissignal-regulatingkinase1,ask1)在丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,mapk)信号转导通路中位于jnk3上游,是jnk3激活的重要调控因素之一。多种应激损伤可以激活ask1,活化的ask1依次激活mkk4-jnk3信号通路,对应激做出应答诱导细胞凋亡。研究进一步发现,ask1/jnk3信号通路的激活需要支架蛋白β-arrestin2的精确锚定作用,形成特异性信号模块ask1-mkk4-jnk3,继而激活jnk3发挥促进细胞凋亡的作用。并有研究证实β-arrestin2与jnk3的结合位点位于jnk3蛋白n端非保守区域(jnk3的n端9-18,cys-ser-glu-pro-thr-leu-asp-val-lys-ile),并且敲除此段结构并不影响jnk3残基对其下游激酶的活化作用。本课题根据β-arrestin2和jnk3的结合位点,设计合成与此位点共轭的小肽,期望以此竞争性干扰jnk3和β-arrestin2的直接结合,从而干扰ask1-mkk4-jnk3特异性信号模块的形成,抑制jnk3的异常激活。为了解决小肽穿透性的问题,在上述小肽的基础上加上hiv-1tat融合肽(tyr-gly-arg-lys-lys-arg-arg-gln-arg-arg-arg)。至此,本研究构建了由上述21个氨基酸组成的治疗肽,称之为jnk3-n-tat。本课题采用经典的mpp+或mptp制备的pd模型,研究结果表明,在mpp+诱导da能sh-sy5y细胞或原代培养的鼠脑皮层神经元而制备的PD细胞模型中,存在ASK 1/J NK3信号通路的异常激活;治疗肽JNK3-N-Tat具有细胞穿透性,可进入细胞内,可通过血脑屏障进入中枢神经系统;体内和体外实验证实治疗肽J NK3-N-Tat可抑制MPP+或MPTP引起的JN K3与β-arr e s tin2的过度结合,影响其信号模块的形成从而抑制JNK3的异常活化。治疗肽JN K3-N-Tat抑制J NK3的激活后,一方面使J NK3核底物c-Jun的磷酸化水平降低;另一方面通过保持线粒体的相对完整性,从而抑制了Cas pa s e3的激活及DA神经元的凋亡。最终治疗肽JNK3-N-Tat可对M PTP或M PP+引起的DA能神经元的损伤起到保护作用。综上所述,在PD模型中,存在β-arr es tin2介导的A SK 1/J NK3信号通路的异常激活,治疗肽J NK3-N-Ta t通过抑制J NK3与β-a rr estin2的结合继而抑制JNK3的异常活化及其下游的核通路与非核通路,从而起到对D A能神经的保护作用。治疗肽JNK3-N-Tat对PD的潜在治疗效应,为探索研究和开发一类毒性小、特异性高、治疗作用强的PD治疗新药提供理论基础及实验依据。本文构建的治疗肽JN K3-N-Tat将为研发PD治疗新药开辟一个崭新的前景。