【摘 要】
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S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine，SAM)作为所有生物体内的重要中间代谢物，具有良好的临床应用价值。为了获得高效合成SAM的重组毕赤酵母，本文构建了AOXl启动子调控的SAM
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S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine，SAM)作为所有生物体内的重要中间代谢物，具有良好的临床应用价值。为了获得高效合成SAM的重组毕赤酵母，本文构建了AOXl启动子调控的SAM合成酶表达载体pPIC3.5K-sam和透明颤菌血红蛋白(VHb)表达载体pPICZA-vgb，转化毕赤酵母得到了表达SAM合成酶的重组菌GS115/sam，共表达SAM合成酶和VHb的重组菌GS115/sam-vgb。
通过摇瓶培养，研究了诱导期甲醇添加浓度对两株重组菌生长、SAM产量、SAM合成酶比产率及单位菌体SAM含量的影响，结果表明，甲醇浓度由0.8％提高至1.6％、2.4％可提高菌体浓度、SAM产量及单位菌体SAM含量，但导致SAM合成酶活力降低，细胞死亡率增加。而VHb的表达在所考察的三个甲醇浓度下都提高了细胞活性和呼吸强度，促进了胞内ATP的合成，从而促进了细胞生长，最终提高SAM产量。通过增加摇瓶装液量，发现VHb的表达能在溶氧不足时促进重组菌GS115/sam-vgb生长，提高SAM比产率。
针对两株SAM高产菌在较高甲醇浓度时所表现的生长优势，以GS115/pPIC3.5K为对照，初步探索了GS115/sam胞内酶促合成SAM对细胞生长的影响。随着甲醇浓度的提高，两株重组菌胞内的过氧化氢酶活性均有所下降，胞内丙二醛的含量却随之上升；在各种甲醇浓度时(O.8％，1.6％，2.4％)，重组菌GS115/sam中SAM的合成都增强了细胞活性，也提高了过氧化氢酶活力，但对胞内丙二醛MDA含量无影响。说明SAM合成可能有助于细胞抵抗氧化胁迫。
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