【摘 要】
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Mitofilin是线粒体重要的内膜嵴形态维持蛋白，干涉Mitofilin的表达，细胞凋亡增加，但对其影响凋亡的具体机制稍不明确。本研究以此为切入点，进行了对其下调诱导细胞凋亡的机制研究
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Mitofilin是线粒体重要的内膜嵴形态维持蛋白，干涉Mitofilin的表达，细胞凋亡增加，但对其影响凋亡的具体机制稍不明确。本研究以此为切入点，进行了对其下调诱导细胞凋亡的机制研究。本论文首先对Mitofilin的功能进行了研究，构建了Mitofilin的慢病毒干涉载体，并且获得了干涉Mitofilin的稳定细胞株。在此基础上，通过间接免疫荧光技术，激光共聚焦显微镜观察线粒体网络结构，透射电子显微镜观察线粒体内膜结构变化，并且利用特异性染料标记细胞内分子，流式细胞术检测线粒体功能。结果发现，下调Mitofilin的表达，线粒体功能损伤。进一步检测了Mitofilin蛋白下调介导的细胞行为学效应。正常条件下，下调Mitofilin的表达，细胞凋亡比例增加。本实验利用依托泊苷(10μg/mL)诱导细胞凋亡，检测了过表达和干涉Mitofilin细胞凋亡变化。实验室前期通过酵母双杂交阵列筛选和GST沉降技术发现Mitofilin和Tim23存在蛋白质相互作用。本研究通过外源和内源免疫共沉淀证实Mitofilin与Tim23存在相互作用。进一步构建了Mitofilin和Tim23的截短体，并且通过GST沉降实验确定了两者相互作用的区段。本实验进一步检测了回转Tim23及其相应缺失体后，细胞凋亡的变化情况，并且利用蛋白质稳定性实验检测了Mitofilin对Tim23稳定性的影响。实验发现，过表达Mitofilin可以减少依托泊苷刺激下的细胞凋亡，并有效抑制Tim23的降解；相反，干涉Mitofilin可以加快细胞凋亡进程，加速Tim23的降解，但是体系中回转Tim23，凋亡比例有所下降，而回转Tim23的缺失体后，细胞凋亡无明显变化。综上所述，我们得出以下结论，Mitofilin对线粒体的功能至关重要，并且可以参与细胞凋亡过程，Mitofilin通过与Tim23的相互作用影响细胞凋亡进程，揭示了其对细胞凋亡影响的分子机制，并且为进一步研究这一对相互所用介导的生物学效应奠定了基础。
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