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论文对EphB3在非小细胞肺癌中的双重作用进行了探讨,分为两个部分:第一部分研究了EphB3在非小细胞肺癌发生发展过程中的作用和相关机制；第二部分对EphB3的磷酸化在非小细胞肺癌迁移的抑制作用进行了研究。
EphB3在非小细胞肺癌中高表达并且通过增强细胞存活和迁移的能力促进肿瘤的发展
Eph激酶作为最大的受体酪氨酸激酶家族,在早期发育和成年期中都发挥着重要的作用。近年来Eph家族成员在肿瘤发生发展过程中的作用也得到了广泛的关注。目前,EphB3在肿瘤中的作用主要集中在EphB受体家族对结肠癌的抑制作用,而在其他肿瘤中的报道还很少。在本项研究中,我们发现EphB3在配对的非小细胞肺癌组织(non-small cell lung cancer,NSCLC)和细胞株中呈现高表达的趋势,并且它的表达水平和临床病理参数密切相关,包括肿瘤大小,分化程度以及转移。在非小细胞肺癌细胞系H520中过表达EphB3能够促进细胞的生长和迁移,并且显著增强细胞在裸鼠体内的成瘤能力,而由RNA干扰介导的对EphB3的表达下调则显著抑制了肿瘤细胞的生长,迁移以及在体内的成瘤和转移能力。进一步的,我们发现干扰EphB3引起的生长抑制是DNA合成降低和caspase-8介导的凋亡途径所共同作用的结果。另一方面,干扰EphB3引起FAK(pY397)和Paxillin(pY118)水平的上升、粘着斑(Focal adhesion)数目的增加以及周转速度的减慢,导致细胞迁移能力的下降。总之,我们的工作揭示了EphB3作为非小细胞肺癌中的一个生存因子,通过刺激细胞的增殖和迁移以及提高细胞的存活能力,促进了肿瘤的生长和转移。
非小细胞肺癌中磷酸化的EphB3抑制细胞的迁移
EphB3作为受体酪氨酸激酶,具有磷酸化和非磷酸化的信号通路,参与了不同的生物学过程。在本项研究中,我们发现在EphB3的两个配体ephrinB1和ephrinB2在配对的非小细胞肺癌组织中的表达水平下调,并且它们同EphB3在组织中表达差异的相关性预示了EphB3在肿瘤中的低磷酸化状态,并且该结论通过组织蛋白的IP-Western blot实验进一步得到了验证。在细胞实验中,利用纯化的ephrinB1-Fc和ephrinB2-Fc融合蛋白刺激非小细胞肺癌细胞株引起细胞迁移能力的下降,促使细胞间的连接更加紧密,而通过EphB3胞外段的融合蛋白EphB3-Fc竞争性阻断受体的磷酸化则促进了细胞的迁移。通过比较磷酸化水平不同的EphB3突变体EphB3EE,EphB3FF和EphB3KD,我们发现细胞的迁移速度和磷酸化程度呈现相反的关系。进一步的,小鼠体内转移实验显示EphB3的磷酸化抑制了细胞在裸鼠体内的转移能力。因此,我们的研究表明ephrinB1和ephrinB2配体在肿瘤中表达的下降维持了EphB3的低磷酸化水平,促进了非小细胞肺癌的转移。