【摘 要】
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在献血及输血过程中,ABO和RhD血型鉴定及HIV-1、HIV-2、HBV、HCV和Syphilis的检测是国家强制性检测项目。目前血型检查采用平板法,血液病原微生物则用ELISA法检测。现行检测
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在献血及输血过程中,ABO和RhD血型鉴定及HIV-1、HIV-2、HBV、HCV和Syphilis的检测是国家强制性检测项目。目前血型检查采用平板法,血液病原微生物则用ELISA法检测。现行检测方法的主要缺陷是不能同步检测,而且测试时间长、耗费试剂多。而芯片技术由于具有高通量、可平行检测、用时少、节省试剂、易于实现自动化等优点,已日益引起医学检验领域的关注。本研究拟构建可对ABO血型进行正反定型的蛋白质芯片,并检验其灵敏度、准确性以及稳定性,以便为构建包括ABO、Rh血型正反定型和经血液传播病原体检测的蛋白质芯片奠定基础。材料与方法第一部分硅酸和醛基基片的优劣对比1.硅酸修饰基片的制作及血型抗原抗体反应条件的优化:将硅酸钠溶液滴加到清洁玻片上,烘干后加入冰乙酸液,在玻片表面形成硅酸薄膜以制备成硅酸基片。包被抗-A、抗-B于硅酸基片上,并作阴性对照1(未经硅酸修饰处)加血型抗体、阴性对照2(经硅酸修饰处)加生理盐水。然后放入湿盒,4℃保存过夜。然后加入2%的对应RBC生理盐水混悬液室温反应5min,用PB(pH8.0)冲洗后,立即在显微镜下计数RBC。在3min、5min、10min的反应时间、24℃和37℃的反应温度以及pH5.7、6.5、7.0、7.5、8.0的条件下进行组合,并分为20个实验组,每组进行4次实验。计数已包被血型抗体的硅酸基片结合的红细胞(Red Blood Cells, RBC)数,取均值。2.硅酸和醛基修饰基片包被血型抗体的比较:将0.4μl血型抗体分别包被在硅酸和醛基修饰的玻片上,然后加入对应的2%RBC生理盐水混悬液与之反应,经PB冲洗后,立即在显微镜下计数10个低倍视野下的RBC数,以求出RBC的均值/低倍视野。3.包被抗原的硅酸和醛基基片结合荧光标记抗体的比较:将不同稀释倍数的兔血
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