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胎膜早破（premature rupture of membrane, PROM）即临产前发生胎膜破裂。是产科常见的妊娠期并发症，且近年发病呈上升趋势。关于PROM的发病原因及发病机制，目前还未完全清楚。研究发现PROM与感染密切相关[1]。PROM合并感染后根据有无临床表现，可分为临床绒毛膜羊膜炎和亚临床感染，亚临床感染即组织学绒毛膜羊膜炎（HCA）。HCA早期无明显临床症状和体征，但分娩后胎盘组织的病理结果提示已有炎症浸润。PROM合并HCA可导致严重的母儿并发症，甚至死亡。近年来，早期诊断HCA受到学者的广泛关注，但至今尚未找到敏感性、特异性强的指标。氧化型α1-抗胰蛋白酶（ox-AAT）是α1-抗胰蛋白酶（AAT）的一种存在形式。ox-AAT是炎症反应的产物，在加重、放大炎症反应的过程中起重要作用。炎症细胞释放的自由基可以作用AAT的活化位点，使其氧化成ox-AAT，从而失去抑制蛋白酶及抗炎功能。中性粒细胞弹性蛋白酶（NE），主要由中性粒细胞（PMN）脱颗粒释放，是丝氨酸蛋白酶超家族成员之一。当炎症发生时，PMN发生趋化作用，可以清除病原菌，促进损伤组织的修复。但是，炎症反应过度可导致NE释放增多，发生组织的损伤及炎症的放大现象。目的本研究通过检测PROM孕妇血清、脐血血清及胎膜组织中ox-AAT和NE的水平及它们之间的相关性，探讨ox-AAT、NE与组织学绒毛膜羊膜炎的关系，以期寻找早期诊断组织学绒毛膜羊膜炎的敏感指标。资料与方法1研究对象与分组选择2012年9月至2013年3月在郑州大学第三附属医院住院分娩的PROM孕妇，排除诊断为临床绒毛膜羊膜炎、肝炎、肾炎、上呼吸道感染等感染性疾病的患者，共入选60例PROM孕妇。根据分娩后胎盘组织病理结果是否诊断为HCA分为两组：①HCA组22例，②对照组38例。PROM的诊断标准参照谢幸、苟文丽主编的《妇产科学》第8版[1]；临床绒毛膜羊膜炎的诊断标准：孕妇T>37.8℃、P>120次/分、胎儿HR>160次/分，并伴下列两条标准中的任意一条：子宫压痛或羊水有臭味[2]；组织学绒毛膜羊膜炎（HCA）的诊断标准：胎盘组织HE染色后，根据显微镜下每高倍视野炎性细胞数量>5个[3]诊断。所有孕妇入院后记录一般资料，检测C反应蛋白（CRP）及白细胞（WBC）计数。收取标本前均取得入选对象的知情同意。2实验方法2.1血清标本采集：所有入选对象入院后、应用抗生素前，留取外周血5ml，离心后，取血清低温保存。胎儿娩出后留取脐血5ml，离心低温保存。2.2胎膜、胎盘组织标本采集：胎盘娩出后取胎膜破口至胎盘边缘的胎膜，约1cm×4cm，冷生理盐水冲洗表面血迹，使成卷状，用大头针固定，分为两部分，一部分放入冻存管后迅速投入液氮，一部分甲醛固定。避开钙化点取2cm×2cm大小胎盘全层3～4块，甲醛固定。2.3酶联免疫吸附（enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）实验检测孕妇外周血、脐血中ox-AAT和NE的水平。2.4采用逆转录PCR技术检测胎膜组织中ox-AAT mRNA、NE mRNA的表达水平。2.5采用免疫组化方法检测ox-AAT、NE在胎膜、胎盘组织中的表达。3统计学方法应用SPSS13.0统计软件分析，计量资料采用均数±标准差（X S）表示；组间比较采用独立样本的t检验或秩和检验。计数资料采用率表示，组间比较用2检验。相关性分析采用Pearson相关分析。以α=0.05为检验水准。结果1HCA组和对照组一般资料的比较两组孕妇的年龄、分娩孕周比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；HCA组孕妇破膜-胎儿娩出时间、WBC计数及CRP水平较对照组高，但差异均无统计学意义（P>0.05）。2HCA组和对照组孕妇外周血、脐血中ox-AAT及NE的表达水平HCA组孕妇血清中ox-AAT和NE的水平分别为（2.328±0.014）、（0.407±0.082）ng/L，对照组ox-AAT和NE的水平分别为（1.503±0.12）、（0.260±0.090）ng/L，HCA组与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；HCA组脐血中ox-AAT和NE的水平分别为（2.920±0.182）、（0.744±0.065）ng/L，对照组ox-AAT和NE的水平分别为（2.433±0.004）、（0.415±0.010）ng/L，HCA组与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。3HCA组与对照组胎膜组织中ox-AAT mRNA、NE mRNA的表达水平HCA组胎膜组织中ox-AAT mRNA的水平（0.960±0.03）和NE mRNA的水平（0.670±0.075）明显高于对照组（0.532±0.01、0.271±0.09）水平，差异均有统计学意义（P<0.05）。4HCA组与对照组胎膜组织中ox-AAT、NE蛋白水平的表达HCA组胎膜组织中ox-AAT的水平（0.023±0.005）和NE的水平（0.019±0.002）均高于对照组（0.015±0.002、0.005±0.001），差异均有统计学意义（P<0.05）。5HCA组与对照组胎盘组织中ox-AAT、NE蛋白水平的表达HCA组胎盘组织中ox-AAT的水平（0.182±0.001）和NE的水平（0.261±0.003）均显著高于对照组（0.04±0.008、0.055±0.009），差异均有统计学意义（P<0.05）。6相关性分析6.1两组孕妇外周血中ox-AAT、NE的水平分别与脐血中两者水平的相关性HCA组孕妇外周血中ox-AAT的水平与脐血中ox-AAT的水平呈正相关，r=0.825，P<0.05；HCA组孕妇外周血中NE的水平与脐血中NE的水平呈正相关，r=0.847，P<0.05。对照组分别无相关性。6.2HCA组孕妇外周血中ox-AAT、NE的表达水平分别与胎膜组织中两者水平的相关性HCA组孕妇外周血中ox-AAT的表达水平与胎膜组织中ox-AAT的表达呈正相关性，r=0.836，P<0.05；HCA组孕妇外周血中NE的表达水平与胎膜组织中NE的表达呈正相关性，r=0.867，P<0.05。6.3HCA组ox-AAT与NE的相关性HCA组孕妇外周血中ox-AAT与NE呈正相关性，r=0.885，P<0.05；脐血中ox-AAT与NE呈正相关性，r=0.756，P<0.05；胎膜组织中ox-AAT和NE呈正相关性，r=0.876，P<0.05。7两组孕妇及新生儿结局的比较60例孕妇中无一例发生胎盘早剥、产后出血及产褥感染。HCA组以剖宫产终止妊娠者18例，对照组9例，组间比较，差异有统计学意义（2=12.59，P<0.05）。60例新生儿，HCA组中1例因败血症死亡，15例发生肺炎，无新生儿脐炎及坏死性肠炎发生，对照组中13例发生肺炎，组间比较差异有统计学意义（2=6.461，P<0.05）。结论1．孕妇外周血、脐血和胎膜组织中ox-AAT、NE的水平升高与组织学绒毛膜羊膜炎密切相关。2．监测血清中ox-AAT、NE的水平为组织学绒毛膜羊膜炎的早期诊断提供依据。