凝结芽孢杆菌基因电转化方法研究

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凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)是一种非常有工业应用前景的微生物,但遗传转化的困难是限制对其进行代谢工程改造的关键因素。本研究系统地优化了凝结芽孢杆菌P4-102B电击转化的条件,主要包括菌体生长状态、电转参数、高渗剂和弱化细胞壁试剂等。研究发现,在培养基、电击缓冲液和复苏培养基中添加高渗剂山梨醇和甘露醇有利于提高电转效率。高渗条件下B.coagulans P4-102B的电转化效率最高可达2.7×102 CFU/μg DNA,比低渗条件下的最高电转化效率1.8×102 CFU/μg DNA提高了50%,并且电击转化效率稳定性增加且重复性提高。在上述高渗条件的基础上,在电击缓冲液中添加海藻糖进一步显著提高了凝结芽孢杆菌P4-102B的电击转化效率。在电击缓冲液中添加了0.5 mol/L海藻糖后,电击转化效率最高可达12×102 CFU/μg DNA,是低渗条件下的6.7倍。实验证明,高渗体系下电击转化效率提高的原因是提高了感受态细胞存活率。本研究结果为凝结芽孢杆菌的电击转化提供了新的方法,也为凝结芽孢杆菌的基因转移和分子生物学研究奠定了基础。
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