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第一部分CAMK2N1真核表达载体的扩增、测序鉴定及体外表达验证目的扩增CAMK2N1真核表达载体(pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒)并进行测序鉴定。将pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转染前列腺癌细胞系PC3细胞后验证过表达CAMK2N1的效果,为后续实验在PC3细胞中过表达CAMK2N1蛋白提供保证。方法(1)将pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转化大肠杆菌感受态细胞,扩增后提取质粒,进行DNA测序,与基因库序列进行比对；(2)体外培养前列腺癌细胞系PC3细胞,用脂质体转染法将pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转染至PC3细胞,24h后采用聚合酶链式反应(PCR)法以及免疫印迹法(Western blotting)检测CAMK2N1的表达变化。结果(1)成功扩增pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒,经测序鉴定载体所携带的CAMK2N1ORF序列准确无误；(2) pCMV6-AC-GFP-C AMK2N1质粒转染PC3细胞后,能在mRNA水平以及蛋白水平上调CAMK2N1的表达。结论pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒能在真核细胞内成功表达CAMK2N1-GFP融合蛋白,为下一步使用该载体在前列腺癌细胞内过表达CAMK2N1蛋白奠定了基础。第二部分过表达CAMK2N1对前列腺癌细胞生长抑制作用的体外研究目的将pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转染体外培养的前列腺癌细胞系PC3细胞,上调CAMK2N1蛋白的表达后,检测对PC3细胞生长曲线、增殖率、细胞周期、凋亡率、细胞侵袭性的影响。方法前列腺癌PC3细胞培养于含10%(体积分数)胎牛血清的RPMI1640培养基中,置于含5%CO2的37℃培养箱中。将细胞分为三组:空白组、对照组、实验组,处理方式分别为不加干预、转染pCMV6-AC-GFP空载体、转染pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒,转染采取脂质体法(Lipofectamine2000)。转染24h后,采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8, CCK-8)检测各组细胞的生长情况,绘制生长曲线；EdU (5-ethynyl-2’-deoxyuridine)核素掺入法检测细胞增殖率流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡率；Transwell小室法检测细胞侵袭力。结果与空白组和对照组相比,实验组上调CAMK2N1的表达后,细胞生长受到抑制,细胞增殖率下降,细胞周期分布中G0/G1期细胞比例增大,细胞侵袭性降低。各组细胞凋亡率未见明显差异。结论通过转染pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒后上调CAMK2N1的表达,能抑制PC3细胞生长,降低细胞增殖率,诱导G0/G1期细胞阻滞,并且降低细胞侵袭性。在体外实验证实了CAMK2N1具有肿瘤抑制作用。第三部分CAMK2N1在前列腺癌组织中的表达以及与临床病理特征相关性的研究目的检测CAMK2N1蛋白在前列腺癌组织中的表达情况,并分析CAMK2N1的表达与前列腺癌临床病理特征之间的联系。方法收集2007年10月～2011年4月武汉同济医院病理科存档前列腺组织标本78例,分成三组：前列腺癌组(n=34),良性前列腺增生(BPH)组(n=28),正常前列腺组(n=16)。应用免疫荧光法检测CAMK2N1在前列腺组织中的表达定位,免疫组化法检测CAMK2N1、Ki-67以及p27Kipl在前列腺癌中的表达水平并作定量分析。收集前列腺癌患者的相关临床病理资料,包括术前前列腺特异性抗原(PSA)水平、前列腺外侵犯情况、临床分期、病理分级、Gleason评分等,分析CAMK2N1的表达与临床病理特征之间的联系。结果(1) CAMK2N1在前列腺癌组、BPH组和正常前列腺组中均有表达,表达定位于细胞浆;(2)前列腺癌组CAMK2N1的表达水平显著低于BPH组和正常前列腺组,并且CAMK2N1的表达水平与前列腺外侵犯、临床分期、病理分级、Gleason评分呈负相关,与患者术前PSA水平无显著关系；(3) CAMK2N1的表达水平与Ki-67呈负相关,与p27Kipl呈正相关。结论前列腺癌中存在CAMK2N1的异常表达,并且异常程度与肿瘤的临床病理特征之间存在关联。CAMK2N1可能通过影响细胞增殖、细胞周期相关的蛋白分子而参与前列腺癌的发病。