【摘 要】
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目的:针对ABO及RhD基因结构特点,建立一种以孕妇血浆中胎儿游离DNA为材料,产前准确、快捷预测胎儿血型的技术,找到无创产前诊断新生儿溶血病的新方法。方法:(1)选择来本院进行抗体筛查的身体健康的O型血孕妇为研究对象,首次妊娠且为单胎,丈夫为非O血型,共收集孕妇血浆样本83份,提取胎儿游离DNA。设计出针对ABO基因保守特征性突变的非O与B引物,利用荧光PCR技术检测胎儿ABO基因型,对两种基因
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目的:针对ABO及RhD基因结构特点,建立一种以孕妇血浆中胎儿游离DNA为材料,产前准确、快捷预测胎儿血型的技术,找到无创产前诊断新生儿溶血病的新方法。方法:(1)选择来本院进行抗体筛查的身体健康的O型血孕妇为研究对象,首次妊娠且为单胎,丈夫为非O血型,共收集孕妇血浆样本83份,提取胎儿游离DNA。设计出针对ABO基因保守特征性突变的非O与B引物,利用荧光PCR技术检测胎儿ABO基因型,对两种基因均无扩增的样本,通过检测RASSF1A基因来验证胎儿游离DNA的存在。孕妇分娩后采集胎儿脐带血,血清学方法确定新生儿ABO表型,并与产前基因预测结果对比。(2)选择来我院进行产前检查的孕单胎身体健康RhD阴性孕妇为研究对象,丈夫为RhD阳性,共收集孕妇血浆样本25例,提取胎儿游离DNA。利用荧光PCR方法扩增RhD基因(内含子4,外显子5,7和10)的选定区域检测胎儿RhD血型,对胎儿血型为RhD阴性样本检测RASSF1A基因来验证胎儿游离DNA的存在。孕妇分娩后采集胎儿脐带血,血清学方法确定新生儿RhD表型,并与产前基因预测结果对比。结果:在83份O型血孕妇血浆标本中,有79份产前胎儿ABO基因检测结果与产后新生儿血清学血型相一致:A型的准确率为91.30%(21/23例),B型的准确率为97.22%(35/36例),O型的准确率为100.00%(23/23例),1例标本未提取出胎儿游离DNA。在25份RhD阴性孕妇血浆样本中,有23份样本产前基因检测和产后血清学方法检测RhD血型一致,1例样本归类于不确定组,方法总体准确度为92%(23/25),该方法灵敏度为100%,特异性为85.7%,阳性预测值为94.4%,阴性预测值为100%。结论:孕妇外周血中存在的胎儿游离DNA可用于胎儿血型无创产前诊断,为早期诊断新生儿溶血病找到了一种新的技术方法。
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