远志高频快繁再生体系与烟草遗传转化体系的研究

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随着生物技术的不断发展,组织培养和基因工程对于解决农产品产量低、品质差、病虫害严重等实际问题发挥着重要作用。与此同时,植物快繁体系的建立和高效遗传转化体系的建立也成为了这一领域的研究重点。本实验的研究目的及结果主要有以下三个:  1.远志子叶和下胚轴外植体高频率再生体系的研究:远志(Polygala tenuifolia)是远志科(Polygalaceae)远志属(Polygala)的多年生草本植物,多以根入药。由于其药理功能较多,近年来对远志的需求逐年增长,连年采挖使远志的野生资源遭到严重破坏,且人工栽培技术并不是很完善,使得远志的品质不断下降,不能获得优质种苗。本实验对远志下胚轴和子叶高效再生的条件进行了研究,旨在为远志组织培养快速繁殖体系的建立和利用基因工程手段进行品质改良奠定基础。本实验采用远志无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,筛选出MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L是最适宜远志愈伤组织再生芽诱导的激素组合,并于MS+NAA1.0mg/L+IBA0.1 mg/L培养基上生根,获得完整再生植株。  2.烟草遗传转化体系的初步研究:烟草(Nicotiana tabacum L.)易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株,且烟草的病虫害十分典型,其病毒研究充分。韧皮部是许多植物病虫害直接侵害目标,因此在抗虫、抗病植物基因工程中采用韧皮部特异性启动子来驱动靶基因定位表达于植物韧皮部已经成为研究的重点。启动子A3和A4是从拟南芥的基因组中分离出来的启动子。本实验利用农杆菌介导转化法将A3、A4启动子分别转入烟草,旨在为建立A3启动子和A4启动子的高效遗传转化体系奠定基础,并为两种启动子表达模式的分析提供实验数据。本实验采用叶盘法对烟草进行农杆菌的转化,先将烟草无菌苗的子叶外植体置于MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1 mg/L培养基上与农杆菌进行共培养。两天后,将共培养后的外植体置于MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1 mg/L+Kna75mg/L培养基上。约20天后,大部分外植体分化出抗性芽,外植体的生芽率为31.6%。待不定芽长到1.5cm以上时,约45d左右,切下抗性芽并插入MS+Kna15mg/ml的生根培养基中,且生根率为61.3%。  3.超声波处理花粉介导的烟草转化遗传体系初步研究:烟草作为分子生物学研究和基因工程研究的模式植物,农杆菌介导的烟草遗传转化体系已经相当成熟,但其必须以烟草外植体的组织培养为基础,操作繁琐,实验周期长,既耗时又耗力。本实验利用超声波处理花粉,旨在为建立一种简便的烟草遗传转化方法提供基础。
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