论文部分内容阅读
Unc5家族蛋白作为一个轴突导向跨膜受体，最初从线虫中发现。在脊柱动物中，Unc5受体包括四大类，Unc5a、Unc5b、Unc5c及Unc5d。Unc5受体的特异性配体为分泌性轴突导向分子Netrin，并且通过Netrin的调节介导神经元轴突生长锥排斥作用。多年研究发现，Unc5家族蛋白也在血管生成和致癌作用中起到作用。 本文旨在探索在斑马鱼体内Unc5家族成员Unc5a，Unc5c，Unc5da和Unc5db的具体表达情况及在前脑特异性表达的Unc5家族成员对前脑发育的影响。本文对Unc5基因家族成员（Unc5a，Unc5c，Unc5da和Unc5db）进行反转录PCR(RT-PCR)及原位杂交研究。反转录PCR结果显示所有转录本都在母源时期表达。Unc5c在整个事件轴中持续性表达，从shield时期直至48小时，而Unc5a,Unc5da和Unc5db在24小时及之后的时期具有明显表达。在原位杂交检验中，Unc5a，Unc5da和Unc5db在24小时到48小时胚胎端脑区域明显表达，并在部分丘脑和后脑中也有表达。在Unc5a-Unc5da和Unc5a-Unc5db的荧光原位杂交结果中显示，端脑区域表达有明显重叠。Unc5c在顶板，后脑和嘴部区域具有表达。 Anterior commissure(AC)，即前连合，是一条跨越中线连接两侧大脑半球的神经纤维，它位于斑马鱼脑前端，在端脑的视柄之前。在特异性敲减位于端脑区域表达的Unc5a基因时，AC发育及路径选择发生明显变化。一部分AC仍然沿正常走向形成神经纤维束，另一部分轴突则在接近前侧的位置与原轴突束发生分支，并选择更深层和更靠背侧的路径进行延伸。此时免疫组织化学的结果也显示轴突束发生分支的同时，其轴突束周围神经胶质细胞的分布同时发生改变，并围绕分支的轴突束也呈现分支情况。同时敲减Unc5a基因和Unc5da基因可以明显提高突变率，并出现神经元迁移异常并滞留中线位置的表型。此结果揭示Unc5基因家族在斑马鱼前脑发育和轴突生长及导向中具有重要作用。