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本研究以白介素1(IL-1β)诱导的人肺癌细胞A549和脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7细胞为模型，探讨原花青素抑制COX-2表达的机制，为原花青素的进一步开发利用提供理论依据。
[方法]
1、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定原花青素对IL-1β诱导的A549细胞和LPS诱导的RAW264.7细胞中COX-2mRNA水平的影响。
2、双荧光素酶检测系统测定原花青素对IL-1β诱导的A549细胞中COX-2启动子活性的影响。
3、Westernblot测定原花青素对IL-1β诱导的A549细胞和LPS诱导的RAW264.7细胞核因子κB的亚基p65(NF-κB/p65)蛋白表达的影响。
4、免疫细化法观察IL-1β诱导的A549细胞和LPS诱导的RAW264.7细胞中核因子κB的亚基p65(NF-κB/p65)蛋白表达的影响。
5、Westernblot和免疫细化法测定原花青素对IL-1β诱导的A549细胞和LPS诱导的RAW264.7细胞浆中NF-κB的结合蛋白I-κBα的降解是否有抑制作用。
[结果]
1、原花青素抑制IL-1β诱导的A549细胞和LPS诱导的RAW264.7细胞的COX-2mRNA表达。
2、NF-κB在COX-2的表达中起重要作用，原花青素通过抑制COX-2的启动子活性，从而抑制COX-2的表达。
3、原花青素抑制IL-1β诱导的A549细胞和LPS诱导的RAW264.7细胞的NF-κB/p65蛋白的表达。
4、原花青素抑制NF-κB蛋白的核易位。
5、原花青素抑制IL-1β诱导的A549细胞和LPS诱导的RAW264.7细胞的I-κB蛋白的降解。
[结论]NF-κB在COX-2的表达过程中发挥重要作用，原花青素主要通过抑制NF-κB/p65蛋白的表达，抑制I-κB蛋白的降解，从而抑制COX-2mRNA的表达。