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硒(Selenium,Se)是人和动物体内一种非常重要的微量元素,对于机体的健康有多种生物学功能。在自然界中:硒以无机硒和有机硒两种形态存在,和无机硒相比,有机硒的安全范围更宽,也更有营养价值,是人体补硒的最佳途径。通过对农作物施加无机硒,农作物可以将无机硒转化为有机硒,进而进入食物链,使人体达到安全补硒的目的。花生是我国重要的油料作物和经济作物,被称为长寿果,不但具有很高的营养保健功效,还有很强的富硒能力。本文以黑花生为研究对象,通过土壤施硒、土壤叶面共同施硒、叶面施硒三种方式,研究不同施硒方式以及不同施硒梯度对黑花生各种生理特性及含硒量的影响,以及硒在花生中的不同形态进行分析,得出如下结论:三种不同施硒方式以及不同施硒梯度对花生的生理特性都有影响。比较三种施硒方式,叶面施硒效果最好,土壤叶面次之,土壤施硒效果最差。比较施硒梯度,对于花生的大部分生长指标(出芽率、株高、产量)具有先增长后降低的趋势。过高的施硒浓度会对花生产生毒害作用,导致花生产生烧苗甚至死亡等现象。施硒浓度对于花生的饱满度、叶绿素含量等生长指标没有明显的影响。确定了花生的最佳施硒方式是叶面施硒,最佳的施硒浓度为1.2mg/L左右。当浓度超过4mg/L时,会对花生产生毒害作用,影响花生的正常生长。采用微波消解-氢化物发生-原子荧光光谱法,对富硒花生样品的花生籽粒、花生叶中的硒进行测定。研究不同的微波消解条件和不同体系的氧化剂对富硒花生消解效果的影响。确定最佳氧化剂体系为:HNO3-H2O2(5mL:2mL);微波消解仪条件为:第一步:0.3Mpa、1min;第二步:0.6Mpa、3min;第三步:0.9Mpa、3min;第四步1.3Mpa、2min。黑花生对外源硒有极强的富集能力,叶面施硒方式更有利于黑花生对硒元素的富集,随着富硒营养液浓度的增加,花生中的含硒量也随之增加,但其富硒倍数却在降低,表明了低浓度的硒可以促进花生对硒的吸收,随着富硒营养液浓度的升高却抑制了花生对硒元素的吸收。硒元素在花生中各部位的分布也有很大的差异,花生叶中的含硒量要远远大于花生籽粒中的含硒量。以0.1mol/L NaOH溶液、0.1mol/LHCl溶液、p H为7.2的Tris-HCl溶液、超纯水为浸提剂,对富硒黑花生籽粒中不同形态的硒进行浸提并测定其含量,结果表明,黑花生中可溶态硒的分布规律为:碱溶态>水溶态>酸溶态>Tris-HCl态。碱溶态硒占总硒量的32%左右,水溶态、酸溶态的硒含量,分别占总硒的20%和15%左右,低于碱溶态。Tris-HCl溶解态为10%左右,说明花生籽粒中的硒主要以硒蛋白、硒多糖等有机硒的形式存在。以NaOH溶液为浸提剂,采用碱溶酸沉等电点法对富硒黑花生中可溶性蛋白质进行提取。确定了蛋白质的最佳提取条件为:等电点pH为4.1,浸提液浓度为0.23mol/L、料液比1:23、浸提温度53℃、浸提时间11.2h。使用微波消解-氢化物发生-原子荧光光谱法测定蛋白质中的硒含量,结果表明,花生中蛋白质的硒含量随着施硒梯度的增大而增大,并且蛋白中的硒占总硒的比例也在增大。建立高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS)法测定富硒花生中硒代蛋氨酸(SeMet)含量的方法。富硒花生样品经pH为7.2的Tris-HCl溶液提取,以乙腈:水为70:30的比例为流动相,滤液经Agilent Bond Elut Plexa柱分离,经在线电喷雾离子源ESI正离子化后,采用多反应离子监测方式MRM选择m/Z198.0→109.0、m/Z198.0→181.0和m/z198.0-56.0测定富硒花生中SeMet的含量。SeMet的线性范围为0~250mg/L,准确度在96.1%~101.1%之间,精密度RSD均在5%内,SeMet检出限为0.05769ng/g。结果表明:本方法灵敏度高、精密度高、特异性强、样品处理简单,可用于富硒花生中SeMet含量的测定。