【摘 要】
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藻红蛋白(Phycoerythrin,PE)是广泛存在于蓝藻、红藻、隐藻和少数一些甲藻中的一种捕光色素蛋白[1,2]。其亚基具有一定的荧光,可作为渗入细胞的标记,而且是一种有效的抗肿瘤
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藻红蛋白(Phycoerythrin,PE)是广泛存在于蓝藻、红藻、隐藻和少数一些甲藻中的一种捕光色素蛋白[1,2]。其亚基具有一定的荧光,可作为渗入细胞的标记,而且是一种有效的抗肿瘤光敏剂,且毒副作用小。脂质体作为药物的载体能保护被包裹药物,有效延长药物作用时间,从而提高药物的治疗指数、减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性,增强药物靶向作用,从而选择性杀伤癌细胞[3]。因此探讨将藻红蛋白亚基包裹进脂质体,增强药物对病变组织的靶向性,提高疗效,延缓药物的释放是非常有意义的。 前期研究发现,脂质体的制备方法有很多,藻红蛋白是水溶性大分子蛋白,不稳定,其脂质体的制备方法不同于化学小分子,为了保证制备过程中保持藻红蛋白的生物活性,根据藻红蛋白自身的生化特性以及后期实验的需要,尝试了几种脂质体制备方法,并对制备好的脂质体进行了细胞光动力学实验,主要结果如下: 1.经过几种脂质体制备方法的尝试,薄膜水合-超声分散法为制备该脂质体的最佳方法。旋转蒸发过程中温度严格控制在40℃以下,避免剧烈实验条件,制备的藻红蛋白亚基脂质体通过细胞转染和mTT实验证明了包裹进脂质体中的藻红蛋白亚基仍然保持了很好的生物活性。 2.根据正交实验设计表,选取对制备脂质体影响较大的几个影响因素,进行正交实验,得到了制备藻红蛋白亚基脂质体的最佳工艺条件。 3.由荧光显微镜形态学观察可见藻红蛋白亚基确实包裹进入脂质体中,且仍保有活性;由透射电镜观察可见,藻红蛋白亚基脂质体粒径分布较均匀,外形圆整。激光粒度检测仪检测结果显示,藻红蛋白亚基脂质体粒径分布呈单峰正态,粒径主要范围在100～180 nm,均值为136nm。可见制备的藻红蛋白亚基脂质体粒径分布较均匀,分散性较好。 4.细胞学实验证明,在相同的浓度与时间的情况下,藻红蛋白亚基脂质体比藻红蛋白亚基能较快地转入细胞,其对肿瘤细胞的杀伤效果也略高于藻红蛋白亚基,藻红蛋白亚基脂质体对正常肝细胞HL7702及肝癌细胞HepG-2的转染率有差异,且对肝癌细胞HepG-2的光动力杀伤效果要明显好于正常肝细胞HL7702.细胞凋亡实验证明在藻红蛋白亚基脂质体PDT作用后的细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧或分离成凋亡小体,细胞膜呈泡状膨胀,失去细胞间的连接,呈现出典型的凋亡细胞形态[4]。 结论:通过薄膜水合—超声分散法制备的藻红蛋白亚基脂质体可以很好地保持藻红蛋白亚基的荧光特性及PDT作用效果,且对正常肝细胞及肝癌细胞PDT作用效果有差异。但藻红蛋白亚基脂质体对药物的缓释性、长效性、对不稳定药物的保护作用以及脂质体经过特殊修饰实现药物的肿瘤靶向给药的优势等方面还需要通过进一步实验加以证明。
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