【摘 要】
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对虾白斑综合征病毒( White spot syndrome virus, WSSV)是近十几年里在全球范围内对对虾养殖业危害最严重的病毒病原。由于敏感细胞系的缺乏,该病毒侵染宿主以及在宿主体内
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对虾白斑综合征病毒( White spot syndrome virus, WSSV)是近十几年里在全球范围内对对虾养殖业危害最严重的病毒病原。由于敏感细胞系的缺乏,该病毒侵染宿主以及在宿主体内复制和装配的机理不十分清楚,因此也缺乏对该病毒的有效防治措施。VP28是WSSV的一个主要囊膜蛋白,也是含量最丰的蛋白之一,目前的研究结果发现该蛋白在病毒侵入过程中起重要作用。本论文以提纯的对虾白斑综合征病毒为抗原免疫BALB/C小鼠,用原核表达的VP28蛋白和病毒粒子筛选了6株抗VP28蛋白和1株抗病毒未知蛋白的单克隆抗体,并对抗VP28的单抗进行了鉴定和初步应用。Western blot杂交和Dot blot杂交显示,所有单抗均为针对VP28蛋白空间结构表位的抗体。用单抗3A10和1E7包被酶标板,酶标全病毒多抗作为检测抗体发展了双抗体夹心检测WSSV的ELISA方法。该方法检测纯病毒粒子的下限为8.5×106,检测纯化VP28蛋白的下限为17.8ng。用6株VP28单抗体外中和病毒后进行感染实验,结果表明,其中的4株单抗对病毒有中和作用,可以明显延缓螯虾被病毒感染后的起始死亡时间。挑选其中的一株单抗7B4,用胶体金进行标记可以将VP28定位在病毒囊膜上。表明这些单抗可以用于VP28功能的进一步研究。另外,本文还利用免疫胶体金标记对WSSV的三个可能的细胞吸附蛋白VP36A,VP36B和VP31进行了定位。
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