论文部分内容阅读
水稻是世界上最重要的粮食作物之一,白叶枯病是危害水稻最为严重的细菌性病害,在过去的十几年中,多个水稻抗白叶枯病基因以及白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)的无毒基因的被克隆,水稻及Xoo的全基因组测序也已经完成,所以水稻-白叶枯病菌互作体系是植病研究的重要模式系统,建立并优化白叶枯病菌的检测方法具有重要的理论意义和应用价值。免疫印迹(Western blot,WB)技术有使用方便、特异性强、灵敏度高、假阳性率低等特点,在植物和动物病原物检测中有重要的实用意义。 本研究以Xoo全蛋白质为免疫原,制备了Xoo多克隆抗体,该抗体能够识别所有受检的Xoo小种,没有Xoo小种特异性,与水稻、稻瘟病菌和大肠杆菌样品没有交叉反应,所制备的抗体具有Xoo特异性。本研究建立了检测Xoo的WB技术,检测下限约为3500个Xoo细胞,并且WB信号与Xoo的量在一定范围内有线性关系。水稻接种Xoo菌后5-7天表型可见水稻感病,在本实验中,用WB方法检测Xoo,在人工接种Xoo后第一天,即可检测到水稻中的Xoo,在接种后第2天,即可检测到抗感反应中Xoo数量的显著区别。在水稻-Xoo不亲和反应中,接种后10天,Xoo仅存在于接种部位附近(6cm)的范围内,在水稻-Xoo亲和反应中,接种后10天,可在接种部位12cm范围内检测到Xoo,而在距离接种部位更远的叶片和非接种叶片中,均不能检测到Xoo信号,说明抗病水稻品种对Xoo的繁殖具有更强的抑制作用。 免疫学技术为检测Xoo在水稻中的繁殖提供了一个新的选择,本文建立的免疫印迹方法,操作可在一天内完成,可望替代实验室常用的剪叶计数方法,为鉴定水稻受Xoo的侵染以及水稻-Xoo互作研究提供了有应用价值的方法。