Real-time PCR检测HSV-2的方法学建立及初步应用

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目的: 采用TaqMan MGB技术建立一种检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的实时定量 PCR 新方法。方法: 1. 对 GenBank 报道的十余株 HSV-2 的 DNA 序列中 gG 基因进行序列比对,选择在各株中具有高度保守性的一段序列进行引物设计,同时要考虑这段序列符合实时定量 PCR 的引物及探针设计要求。通过PCR 扩增得到 160bp 大小的 DNA 片段,并将其克隆入 pMD18-T 载体中,构建重组质粒 pMD18-T-gG 作为实时定量 PCR 中的标准品。 2. 以重组质粒 pMD18-T-gG 为模板,探讨实时定量 PCR 的最佳循环参数及反应体系,初步建立检测方法,并对其进行方法学评价(包括重复性、特异性、线性范围等)。 3. HSV-2 实时定量 PCR 方法的初步临床应用。结果: 1. 成功地构建了重组质粒 pMD18-T-gG,经酶切和 PCR 鉴定后与预期结果吻合。核酸序列测定显示插入的部分 gG 基因与 GenBank 报
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