【摘 要】
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当一段DNA链上有连续四段或者四段以上G-tract时,这段DNA会形成分子内的G-四链体。在转录过程中,如果非模板链上有2段或2段以上的G-tract,DNA就可能与RNA产物形成DNA∶RNA杂合G-
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当一段DNA链上有连续四段或者四段以上G-tract时,这段DNA会形成分子内的G-四链体。在转录过程中,如果非模板链上有2段或2段以上的G-tract,DNA就可能与RNA产物形成DNA∶RNA杂合G-四链体。在恒温动物的基因组上,能够形成DNA∶RNA杂合G-四链体的序列分布在转录的非模板链上,并且在转录起始位点下游1000个碱基的范围内分布最多。无论在体内还是在体外,DNA∶RNA杂合G-四链体都能够对转录产生影响。为了能够更深入的了解DNA∶RNA杂合G-四链体的功能,探讨干预其形成的手段,以线性双链DNA为材料,深入研究了DNA∶RNA杂合G-四链体的形成机制。将一段G5AG7序列放在T7启动子的下游,用T7RNA聚合酶转录该DNA双链。研究证实,转录中形成了R-loop和DNA∶RNA杂合G-四链体。R-loop的形成先于DNA∶RNA杂合G-四链体。当转录开始后,新生的RNA产物与模板链形成R-loop,这条配对的RNA在新一轮的转录中又被新生的RNA取代,解离成了一条单链RNA。单链RNA随后又与非模板链形成DNA∶RNA杂合G-四链体。在这个过程中,一条RNA经历了R-loop→单链RNA→DNA∶RNA杂合G-四链体三个不同的状态。针对单链RNA设计了特异互补的DNA探针,在转录开始时加入到体系中。由于探针捕获了单链RNA,使得它没有机会与DNA非模板链相互作用形成DNA∶RNA杂合G-四链体,大大降低了杂合结构的形成比例。本研究不仅揭示了DNA∶RNA杂合G-四链体形成的分子机制,同时也为调控基因表达提供了新的思路。
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