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目的：对融合蛋白d-EGF二级、三级结构进行预测并分析其活性部位的可能影响，进行原核表达，并对表达产物进行分析鉴定。方法：以融合蛋白质基因序列为基础，用DNAStar软件预测其蛋白质的二级结构；用Insight II软件对其三级结构进行建模预测。在对融合蛋白理论预测的基础上，分别构建含β-defensin-3、EGF的重组质粒，应用重组PCR等方法，将EGF的基因序列融合到β-defensin-3DNA序列的3’末端，将融合基因克隆入原核表达载体pET-SUMO,构建目的重组质粒pET-SUMO-d-EGF。采用PCR、测序等方法对目的基因是否正确重组进行鉴定；以重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21（DE3），以IPTG诱导表达目的蛋白质，表达产物经过Ni-trap柱纯化，SDS-PAGE检测表达初产物及纯化产物。最后用Western-blot对其特异性进行鉴定；用MTT法检测其促细胞增殖活性；用纸片扩散法药物敏感试验、微量稀释法检测其抗菌活性。结果：采用DNAStar软件的Gamier Robson方法预测的结果表明，融合蛋白质d-EGF含较多的β折叠结构；Charge Density-Charge法预测蛋白质3-22、31-48区段带丰富的正电荷；Insight II软件分析显示重组蛋白d-EGF中原蛋白β-defensin-3、EGF三级结构中的活性必须的六个链内二硫键在融合蛋白中都能够正确形成，维持β-defensin-3三级结构的3个反向平行的β折叠片结构在融合蛋白中能够形成。融合蛋白的结构含有原蛋白β-defensin-3、EGF的生物活性结构。成功构建β-defensin-3、EGF重组质粒，经重组PCR成功扩增出294bp的目的片段，重组体PCR结果与预期结果一致，测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21（DE3）经IPTG诱导、SDS-PAGE分析得到28kD左右的目的蛋白条带。用Western-blot鉴定出融合蛋白含有EGF，β-防御素-3的相应蛋白抗原表位。用MTT法测得融合蛋白d-EGF EC50约为0.4ng/ml,与EGF标准品EC500.08-0.8ng/ml相符；用纸片扩散法药物敏感实验检测对金黄色葡萄球菌有明显抑菌环出现，抑菌浓度25μg/ml相对标准品h β-defensin-3的MIC12.5μg/ml，说明d-EGF抑菌活性比标准品相对弱一些。结论：在预测融合蛋白d-EGF的二、三级结构的基础上，成功构建原核表达载体pET-SUMO d-EGF,并表达出纯化的融合蛋白，且融合蛋白d-EGF具有促细胞增殖和抗菌活性。