人源抗人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）结构蛋白基因工程抗体的研究

• 作 者: 宋冬梅
• 机 构: 北京生物制品研究所
• 出 处: 北京生物制品研究所
• 发表日期: 2006年期
• 关键词: 人源抗体 基因工程 噬菌体展示技术 人类免疫缺陷病毒 艾滋病

AIDS已经严重威胁着人类的生命健康。尽管许多研究者对AIDS疫苗的研究做出了不少的努力，然而，到目前为止，尚没有一种疫苗在HIV感染的预防控制中获得良好的免疫效果。近年来，有关HIV-1中和抗体在HIV-1感染者体内的作用的研究取得了很大的进展，使许多研究者重新重视对HIV-1中和抗体的研究。目前的许多研究表明，针对HIV的中和表位主要存在于gp160。
本课题运用噬菌体抗体库技术，以期获得人源抗HIV-1gp160基因工程抗体。首先采集具有HIV-1中和抗体的感染者外周血，分离淋巴细胞后提取总RNA，反转录为cDNA第一链，然后利用一组人源抗体IgG1Fab段基因的引物对抗体的重链Fd段和轻链基因分别进行PCR扩增，再将扩增后的轻链、重链基因先后克隆到pComb3X载体，转化E.Coli.XL1-Blue，在辅助噬菌体的作用下，构建了噬菌体抗体库，库容为2.07x106，最后用预包被gp160的ELISA板对噬菌体抗体库进行筛选，经过三轮“吸附-洗脱-富集”的筛选过程，将获得的阳性克隆进行诱导表达，表达产物经ELISA检测，结果获得30株抗HIV-1Fab克隆。对所获得的30株阳性克隆的轻链和重链基因进行了测序、运用EMBL-EBI数据库提供的PairwiseAlignmentAlgorithms对所获得的轻链基因序列和重链基因序列进行了同源性比较，结果获得了9条轻链基因(7条为λ链，2条为κ链)，15条重链基因；通过与HIV序列数据库中的基因序列进行比较，发现所获得的基因序列和已经申请专利的部分抗HIV-1gp120抗体的基因序列有较高的同源性(轻链同源性在60～90％之间；重链同源性在68～92％之间)。通过与IMGT抗体数据库中抗体基因标准序列进行比较分析，分析了我们获得的这些阳性克隆的CDRs序列；并对获得的阳性克隆进行了特异性鉴定。
下一步我们将对表达产物进行体外中和试验，对具有中和活性的Fab进行全抗体表达，并进一步研究其特性。