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目的： X-相关凋亡抑制蛋白(XIAP)是新发现的一种凋亡抑制蛋白，可通过抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(capase)的激活而阻止凋亡的发生。通过检测XIAP基因在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NIC-H460和A549细胞中的表达，设计并构建XIAP短发夹样RNA(short hairpin RNA shRNA)序列的表达载体并研究其对NIC-H460和A549细胞生长和细胞凋亡的影响，探讨XIAP在NSCLC发病中的作用和XIAP shRNA特异序列在诱导NSCLC细胞凋亡的作用。
方法：应用半定量RT-PCR法检测NSCLC细胞NIC-H460和A549细胞中XIAP基因的表达，设计并构建XIAP特异短发夹样RNA (XIAP shRNA)序列的表达载体，转染shRNA载体至NSCLC细胞NIC-H460和A549中，同时设未转染组、阴性shRNA转染组作对照。通过荧光纤维镜确定转染效率，应用MTT法测定阳性转染组、阴性转染组及未转染组细胞增殖情况及化疗药物对其细胞杀伤率，RT-PCR法测定阳性转染组、阴性转染组及未转染组细胞XIAP mRNA表达情况，流式细胞仪测定细胞凋亡率的变化，比色法测定阳性转染组及对阴性转染组的caspase-3、-9活性。
结果：酶切和DNA测序证实XIAP shRNA构建成功。荧光纤维镜显示阳性转染组及阴性转染组转染NIC-H460和A549细胞转染效率无差异。半定量RT-PCR法示XIAP在NSCLC细胞NIC-H460和A549细胞中表达增高；阳性转染组较阴性转染组、未转染组细胞XIAP mRNA表达明显降低；化疗药物顺铂、紫杉醇对阳性转染组XIAP mRNA抑制作用较阴性转染组、未转染组细胞明显增强。MTT法显示阳性转染组较阴性转染组、未转染组细胞增殖在24小时、48小时、72、96小时明显受抑制；化疗药物顺铂、紫杉醇对阳性转染组较阴性转染组、未转染组杀伤率明显增加。流式细胞仪测定细胞凋亡率显示阳性转染组较阴性转染组细胞凋亡率明显增加。比色法显示阳性转染组 caspase-3、-9活性较阴性转染组明显增高。
结论：XIAP基因在NSCLC中表达增高，可抑制NSCLC细胞凋亡，导致NSCLC化疗耐药。XIAP shRNA序列可特异性地抑制NSCLC细胞增长，下调XIAP基因的表达，促进细胞凋亡，增加NSCLC化疗敏感性。XIAP shRNA序列有可能成为NSCLC治疗的靶标。