论文部分内容阅读
甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus, HAV)和戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus HEV)是肠道传播的两种肝炎病毒,两种病毒从分子病毒学到流行病学及其引起的临床症状都很相似,如都是无包膜,单股正链RNA病毒,主要经粪-口途径传播；依靠实验室检查进行鉴别。HAV是肠道传染疾病,主要感染儿童,但随着年龄增加,一旦感染,肝炎症状会更严重。戊型肝炎也是一种肠道传染疾病,在一些国家,急性肝损害和散发急性肝炎病例中50%以上由戊肝引起,在孕妇、原有慢性肝病、老年人等人群中病死率较高,目前报道急性戊肝导致孕妇死亡率可高达25%。我国是戊肝主要流行区之一,曾在新疆发生大规模戊肝暴发流行,引起约12万人发病,死亡人数近千人。甲型肝炎已有疫苗进行预防而戊型肝炎目前还没有疫苗,由于两种病毒有着相似的特性,因此研究联合疫苗具有可能性。本论文主要研究了HAV vp1和HEV ORF2编码的抗原片断形成嵌合类病毒颗粒的免疫原性。将HAV vp1 (aa 24～171)与HEV ORF2 (aa 431～615) N端相连,形成重组抗原AEAg342或与ORF2 C端相连,形成EAAg342重组抗原。将上述两种嵌合抗原基因插入表达载体pBV220构建成表达质粒pBV220-AEAg342和pBV220-EAAg342,然后用质粒转化大肠杆菌BL21进行表达。结果表明pBV220-AEAg342和pBV220-EAAg342在BL21中获得了高效表达,表达的重组蛋白相对分子质量约为36KD。电镜观察只有重组蛋白EAAg342能形成直径10～20nm的类病毒颗粒(VLP颗粒)。Western blot显示两种重组抗原均能分别与甲型肝炎及戊型肝炎患者阳性血清发生特异性反应。随后对重组蛋白AEAg342和EAAg342诱导的特异体液免疫反应以及其与传统甲肝疫苗免疫原性进行了比较。四组昆明鼠,每组6只,分别注射两种重组抗原10μg+弗氏佐剂和传统甲肝灭活／减毒活疫苗100μl,3周及5周后分别再加强免疫一次,同时设一空白对照组。于第一次免疫后2,4,6,8,10和12周采血测特异性抗HAV和HEV IgG滴度。结果显示EAAg342诱导的抗HEV抗体滴度在第8周达到了1：1000 000,显著高于AEAg342组。在抗HAV特异性抗体方面,甲肝灭活疫苗活性最强,其次为甲肝减毒活疫苗,EAAg342组,AEAg342组活性最弱。本研究的结果证明了使用原核系统表达的甲／戊肝重组抗原能够高效表达,嵌合类病毒颗粒(VLP) EAAg342可以诱导良好的抗HAV和HEV免疫反应。此外,嵌入的HAV VP1片断可以增强VLP的免疫原性,同时VLP也赋予了HAV vp1良好免疫原性。具有开发双价疫苗及同时诊断甲型戊型肝炎试剂盒的前景。