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首先根据GenBank登录的SLA-DRA和SLA-DRB基因序列设计特异性引物,引物两端分别加上BamH I铂Xho I酶切位点及保护碱基。通过反转录聚合酶链式反应(PT-PCR)技术,从长白猪肠系淋巴结组织总RNA中扩增出两条特异性基因片段。PCR产物分离纯化后连接到pMD18-T载体,经菌液PCR和双酶切反应筛选出阳性重组克隆后进行序列测定。结果表明本试验成功克隆了SLA-DRA和SLA-DRB基因,两者分别由759和801个核苷酸组成,分别编码252和266个氨基酸。对SLA-DRA和SLA-DRB的结构和功能进行生物信息学预测,发现SLA-DRA氨基酸序列中有2个潜在的N-糖基化位点,Asn141、Asn244可被糖基化,SLA-DRB氨基酸序列中有1个潜在的N-糖基化位点,Asn48可被糖基化。SLA-DRA有4个主要的疏水区,SLA-DRB表现出较强的亲水性。SLA-DRA氨基酸序列中有12个潜在的磷酸化位点:Ser38、Ser42、Ser 116、Ser156、Ser179、Thr64、Thr97、Thr207、Thr216、Thr246、Tyr36和Tyr184,SLA-DRB氨基酸序列中有13个潜在的磷酸化位点:Ser71、Ser92、Ser196、Ser208、Ser221、Ser223、Thr32、Thr50、Thr80、Thr129、Thr186、Thr210和Tyr107。本研究将SLA-DRA、SLA-DRB基因定向克隆到原核表达载体pET32a(+)中,构建了重组融合表达质粒子pET32a-DRA、pET32a-DRB,转化E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达,优化表达条件,并初步纯化重组融合蛋白,结果表明:SLA-DRA、SLA-DRB基因在重组融合表达质粒pET32a(+)中的插入方向和读码框均正确;SLA-DRA、SLA-DRB基因已在E.coli BL21(DE3)中实现了融合表达,其表达量分别占菌体总蛋白的19.88%、17.26%,对表达条件进行了优化,其表达量分别达26.22%、21.98%:诱导2h后pET32a-DRA融合蛋白的表达量达到峰值,诱导3h后pET32a-DRB融合蛋白的表达量达到峰值。通过固定相粒子亲和色谱(IMAC)方法纯化重组融合蛋白,其中咪唑浓度为300mmol/L的Elution buffer的纯化效果都较好,纯化后的重组融合蛋白特异。